英文名稱 : Creatine Kinase(CK) Activity Assay Kit
產(chǎn)品包裝 : 盒裝
產(chǎn)品規(guī)格 : 50T/48S
儲存條件 : -20℃
檢測方法 : 紫外分光光度法
有 效 期 : 6個(gè)月
產(chǎn)品組成:
試劑名稱
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規(guī)格
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保存條件
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提取液
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液體 60 mL×1 瓶
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4℃保存
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試劑一
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粉劑×1 瓶
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-20℃保存
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試劑二
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粉劑×1 支
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-20℃保存
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試劑三
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粉劑×2 支
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-20℃保存
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試劑四
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粉劑×2 支
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-20℃保存
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試劑五
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液體 15 mL×1 瓶
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4℃保存
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產(chǎn)品說明:
肌酸激酶(Creatine Kinase,CK)(EC 2.7.3.2)也成為肌酸磷酸激酶, 主要存在于心臟、肌肉以及腦等組織中, 能可逆地催化肌酸與ATP之間的轉(zhuǎn)磷酰基反應(yīng),是一個(gè)與細(xì)胞能量運(yùn)轉(zhuǎn)、肌肉收縮、ATP再生有直接關(guān)系的重要 激酶。
CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP,己糖激酶催化ATP與葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化6-磷酸葡萄糖與NADP+生成NADPH,導(dǎo)致340nm光吸收值增加,以此來表示CK酶活。
注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品:
天平、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計(jì)、1mL石英比色皿、恒溫水浴鍋、研缽/勻漿器、蒸餾水。
注意事項(xiàng):
1. 血清的CK不穩(wěn)定,采集樣本后盡快測定,4℃避光保存可穩(wěn)定24h。
2. 樣本蛋白質(zhì)含量需要另外測定。
3. OD值大于0.6可用提取液適當(dāng)稀釋樣本,并在計(jì)算公式中相應(yīng)的改變稀釋倍數(shù)。
4. ΔA 空白管一般不超過0.01。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例:
1、取0.1g小鼠腦加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清后再用提取液稀釋4倍,之后按照測定步驟操作,用1mL石英比色皿測得計(jì)算ΔA測定管=A2測定-A1測定=0.638-0.149=0.489 ,ΔA空白管=A2空白-A1空白=0 ,ΔA=ΔA
測定管-ΔA空白管=0.489-0=0.489,按組織樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:
CK活性(U/g質(zhì)量) =268×ΔA÷W×4(稀釋倍數(shù)) =268×0.489÷0.1×4(稀釋倍數(shù)) =5242.08 U/g 質(zhì)量。
2、取鴨血清200μL,按照測定步驟操作,測得計(jì)算ΔA測定管=A2測定-A1測定=0.445-0.423=0.022,ΔA空白管=A2
空白-A1空白=0 ,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.022-0=0.022,按血清體積計(jì)算酶活得:
CK活性(U/mL)=268×ΔA=268×0.022=5.896 U/mL。