英文名稱 ： Glutathione Reductase Activation Coefficient Assay Kit
產(chǎn)品包裝 ： 盒裝
產(chǎn)品規(guī)格 ： 100T/48S
儲存條件 ： -20℃
檢測方法 ： 微量法
有 效 期 ： 6個月
產(chǎn)品組成 ：
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試劑名稱
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規(guī)格
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保存條件
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試劑一
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液體65mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑二
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粉劑×1支
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2-8℃保存
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試劑三 A
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粉劑×1支
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-20℃保存
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試劑三 B
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液體1mL×1支
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2-8℃保存
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試劑四
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液體1.2mL×1支
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2-8℃保存
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試劑五
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粉劑×1支
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-20℃保存
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試劑六
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液體20 mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑七
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液體25 mL×1瓶
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2-8℃保存
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產(chǎn)品說明：
谷胱甘肽還原酶(GlutathioneReductase，GR)是廣泛存在于真核與原核生物中的一種黃素蛋白氧化還原酶，該酶以核黃素衍生物核黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)為輔基，催化NADPH還原氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成還原型谷胱甘肽(GSH)，維持巰基和膜蛋白處于還原狀態(tài)。當生物體內(nèi)缺乏核黃素時，F(xiàn)AD含量相應(yīng)減少，GR活性也隨之降低，谷胱甘肽還原酶活性系數(shù)(GRActivationCoefficient，GRAC)迅速升高，出現(xiàn)唇炎、口角炎、結(jié)膜炎等臨床癥狀。因此，GRAC用于核黃素營養(yǎng)狀況評價，對于早期發(fā)現(xiàn)缺乏病患者采取防治措施具有重要意義。
GR催化NADPH還原GSSG，生成GSH，GSH與5，5’-二硫代-雙-(2-硝基苯甲酸)(5，5’-dithiobis-2-nitrobenoicacid，DTNB)反應(yīng)產(chǎn)生2-硝基-5-巰基苯甲酸，2-硝基-5-巰基苯甲酸在波長412nm處有特征吸收峰，通過412nm處吸光度的變化可計算GR的活性。根據(jù)加入FAD前后GR活性的變化可計算得到GRAC。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、低溫離心機、分析天平、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
注意事項：
1.建議準備核黃素水平正常的樣本進行檢測，方便與核黃素缺乏的樣本進行比較；如果沒有核黃素水平正常的樣本，可參考一般核黃素水平正常的樣本GRAC為0.9-1.2；
2.如果樣本測定管吸光值大于1.5，建議將樣本用試劑一稀釋后進行測定；如果樣本測定管吸光值接近空白管，可適當增大樣本質(zhì)量重新提取或提高加樣表中樣本體積，對照管、空白管蒸餾水需進行相應(yīng)調(diào)整。
3.樣本蛋白濃度需自行測定。由于提取液中含有一定濃度的蛋白(約0.11mg/mL），所以在測定樣本蛋白濃度時需要減去提取液本身的蛋白含量。
實驗實例 ：
1.取0.1051g大鼠腎臟樣本，加入1mL試劑一進行冰浴勻漿，離心后取上清，按照測定步驟操作，用96孔板測得：A測定=0.370，A對照=0.360，A空白=0.107，計算得：
GRAC=(A測定-A空白)÷(A對照-A空白)=1.040。
2.取10μL人紅細胞，加入990μL試劑一，充分溶血混勻，離心后取上清，按照測定步驟操作，用96孔板測得：A測定=0.479，A對照=0.461，A空白=0.107，計算得：
GRAC=(A測定-A空白)÷(A對照-A空白)=1.051。
3. 取馬血清樣本，直接按照測定步驟操作，用96孔板測得：A測定=0.397，A對照=0.392，A空白=0.107，計算得：GRAC=(A測定-A空白)÷(A對照-A空白)=1.018。
