英文名稱 ： Glutamine (Gln)Content Assay Kit
產(chǎn)品包裝 ： 盒裝
產(chǎn)品規(guī)格 ： 50T/48S
儲(chǔ)存條件 ： -20℃
檢測(cè)方法 ： 可見(jiàn)分光光度法
有 效 期 ： 6個(gè)月
產(chǎn)品組成 ：
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試劑名稱
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規(guī)格
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保存條件
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提取液一
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液體70mL×1瓶
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2-8℃保存
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提取液二
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液體15mL×1瓶(自備)
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2-8℃保存
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試劑一
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液體3mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑二
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粉劑×2瓶
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-20℃保存
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試劑三
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液體10mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑四
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粉劑×1瓶
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-20℃保存
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試劑五
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粉劑×1瓶
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-20℃保存
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試劑六
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液體8mL×1瓶
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2-8℃保存
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標(biāo)準(zhǔn)品
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液體1mL×1支
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2-8℃保存
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產(chǎn)品說(shuō)明 ：
谷氨酰胺(Glutamine)簡(jiǎn)稱Gln，是谷氨酸的酰胺，是組成蛋白質(zhì)的重要氨基酸之一，同時(shí)谷氨酰胺也是三羧酸循環(huán)中α-酮戊二酸的主要來(lái)源。谷氨酰胺在生物體內(nèi)以游離態(tài)和結(jié)合態(tài)兩種狀態(tài)存在，游離的谷氨酰胺是在生物體代謝中起著重要作用，其代謝占細(xì)胞和血液循環(huán)中自由氨基酸的60%以上。
游離谷氨酰胺在谷氨酰胺酶的催化作用下轉(zhuǎn)變?yōu)楣劝彼?，谷氨酸脫氫?GDH)催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADH和NH4+，在1-mPMS作用下，WST可與NADH反應(yīng)，產(chǎn)生水溶性formazan，其在450nm處有吸收峰，據(jù)此可計(jì)算谷氨酰胺含量。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、氯仿、1mL玻璃比色皿、冰和蒸餾水。
注意事項(xiàng) ：
1、如果需要測(cè)蛋白濃度，需在加提取液二之前測(cè)定蛋白濃度。
2、如果離心后待測(cè)的上清依然渾濁，可嘗試加大離心轉(zhuǎn)速或者延長(zhǎng)時(shí)間，例如12000g4℃離心5min。
3、ΔA測(cè)定的測(cè)定范圍在0.005-0.7之間。如果測(cè)定吸光值超過(guò)線性范圍吸光值，可以用蒸餾水稀釋樣本后再次測(cè)定，如果測(cè)定吸光值小于線性范圍吸光值，需要增加樣本量后再次測(cè)定，注意同步計(jì)算公式。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例 ：
1.取0.1468g草莓，將樣本進(jìn)行前處理，用蒸餾水稀釋2倍后按照測(cè)定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測(cè)定吸光度并計(jì)算A測(cè)定=0.535，A對(duì)照=0.1，?A測(cè)定=0.435，A標(biāo)準(zhǔn)=0.547，A空白=0.067，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=0.48。按樣本質(zhì)量計(jì)算Gln含量得：谷氨酰胺含量(μmol/g質(zhì)量)=ΔA測(cè)定×0.4÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×2=4.939μmol/g質(zhì)量。
2.取0.12g兔肌肉，將樣本進(jìn)行前處理，用蒸餾水稀釋2倍后按照測(cè)定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測(cè)定吸光度并計(jì)算A測(cè)定=0.351，A對(duì)照=0.136，?A測(cè)定=0.215，A標(biāo)準(zhǔn)=0.547，A空白=0.067，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=0.48。按樣本質(zhì)量計(jì)算Gln含量得：谷氨酰胺含量(μmol/g質(zhì)量)=ΔA測(cè)定×0.4÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×2=2.986μmol/g質(zhì)量。
3. 取0.5mL羊血清，按照測(cè)定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測(cè)定吸光度并計(jì)算A測(cè)定=0.402，A對(duì)照=0.253，?A測(cè)定=0.149，A標(biāo)準(zhǔn)=0.547，A空白=0.067，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=0.48。按液體體積計(jì)算Gln含量得：谷氨酰胺含量(μmol/mL)=ΔA測(cè)定×0.4÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=0.124μmol/mL。
