英文名稱 :Glutamate(Glu)Content Assay Kit (WST colorimetry)
儲存條件 :-20℃
產品包裝 :盒裝
檢測方法 :微量法
有 效 期 :6個月
產品規(guī)格 :100T/48S
產品組成:
試劑名稱
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規(guī)格
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保存條件
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試劑一
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液體85mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑二
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液體1.5mL×1支
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2-8℃保存
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試劑三
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粉劑×2瓶
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-20℃保存
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試劑四
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粉劑×2支
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-20℃保存
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試劑五
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液體4mL×1瓶
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2-8℃保存
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標準液
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液體0.5mL×1支
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2-8℃保存
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產品說明:
Glu廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,不僅是組成蛋白質的20種氨基酸之一,而且通過轉氨基作用參與多種氨基酸合成,是生物體內主要氨基來源之一。此外,Glu還是味精的主要有效成分,常用做食品添加劑以及香料生產。
谷氨酸脫氫酶(GDH)催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADH和NH4+,在1-mPMS作用下,WST-1可與NADH反應,產生水溶性formazan,計算谷氨酸含量。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗,如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/超聲破碎儀、冰、蒸餾水。
注意事項:
如果測定吸光值超過線性范圍吸光值, 可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進行測定。
實驗實例:
1 、稱取約 0.1g 鼠肺, 加入 1mL 試劑一,冰浴研磨, 10000g,常溫離心 10min 取上清,待測。之后按照測 定步驟操作,用 96 孔板測得計算 ΔA =A2 -A1=0.449-0.384=0.065,標準曲線 y=1.5338x+0.0091,根據(jù)標 曲得出 x=0.036,谷氨酸含量得:谷氨酸含量(μmol/g 質量) =x×V 樣本÷(W÷V 樣總×V 樣本) =x÷W=0.36μmol/g。
2、吸取 0.04 mL 羊血清,按照測定步驟操作, 用 96 孔板測得計算 ΔA =A2-A1=0.379-0.105=0.274,標準曲
線 y=1.5338x+0.0091,根據(jù)標曲得出 x=0.173,谷氨酸含量得:
谷氨酸含量(μmol/mL)=x×V 樣本÷V 樣本=x=0.173μmol/mL。