英文名稱 ： CoenzymeⅠNAD(H) Content Assay Kit (WST colorimetry)
產品包裝 ： 盒裝
產品規(guī)格 ： 50T/24S
儲存條件 ： -20℃
檢測方法 ： 可見分光光度法
有 效 期 ： 6個月
產品組成 ：
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試劑名稱
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規(guī)格
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保存條件
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酸性提取液
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液體15mL×1瓶
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2-8℃保存
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酸性提取液
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液體15mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑一
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液體20mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑二
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液體6mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑三
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液體12mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑四
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液體3mL×1瓶
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-20℃保存
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試劑五
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液體40mL×1瓶
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2-8℃保存
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NAD標準品
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粉劑×1支
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-20℃保存
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NADH標準品
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粉劑×1支
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-20℃保存
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產品說明：
輔酶I包括還原型和氧化型兩種形式，在生物氧化中起傳遞氫的作用。氧化型輔酶I又稱煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)是脫氫酶的輔酶，它在糖酵解、糖異生、三羧酸循環(huán)和呼吸鏈中發(fā)揮著不可替代的作用。中間產物會將脫下的氫遞給NAD，使之成為NADH(還原型輔酶I)。
而NADH則會作為氫的載體，在呼吸鏈中通過化學滲透偶聯的方式，合成ATP。NAD(H)在機體內有重要的生理意義，與物質代謝、能量代謝、抗細胞衰老、抗氧化以及一些疾病的發(fā)生密切相關。體內輔酶I含量降低會導致細胞損傷或衰亡。
分別用酸性和堿性提取液提取樣本中NAD+和NADH，在1-mPMS作用下，WST-1可與NADH反應，產生水溶性formazan，在450nm下有特征吸收峰，而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH，進一步采用WST-1檢測。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋，研缽/勻漿器、超聲破碎儀、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸餾水。
注意事項：
1、反應過程中注意避光。
2、如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進行測定。同步修改計算公式。
實驗實例：
1、NAD+的測定：稱取0.1g冬青葉片，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，玻璃比色皿測得吸光值后計算ΔA測定=A測定-A對照=0.113-0.089=0.024，標準曲線y1=0.5982x+0.0038,根據標曲得出x1=0.034，NAD+含量得：
NAD+(nmol/g質量)=x1÷W=0.34nmol/g質量。
NADH的測定：稱取0.1g冬青葉片，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，玻璃比色皿測得吸光值后計算ΔA測定=A測定-A對照=0.250-0.168=0.082，標準曲線y2=0.4452x-0.0008,根據標曲得出x2=0.186，NADH含量得：
NADH(nmol/g質量)=x2÷W=1.86nmol/g質量。
2、NAD+ 的測定：稱取0.1g小鼠肝臟，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，玻璃比色皿測得吸光值后計算ΔA測定=A測定-A對照=0.068-0.045=0.019，標準曲線y1=0.5982x+0.0038,根據標曲得出x1=0.025，NAD+ 含量得：
NAD+(nmol/g質量)=x1÷W=0.25nmol/g質量。
NADH的測定：稱取0.1g小鼠肝臟，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，玻璃比色皿測得吸光值后計算ΔA測定=A測定-A對照=0.217-0.118=0.099，標準曲線y2=0.4452x-0.0008,根據標曲得出x2=0.224，NADH含量得：
NADH(nmol/g質量)=x2÷W=2.24nmol/g質量。
3、NAD+的測定：取0.1mL馬血清，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，玻璃比色皿測得吸光值后計算ΔA測定=A測定-A對照=0.113-0.074=0.039，標準曲線y1=0.5982x+0.0038,根據標曲得出x1=0.059，NAD+含量得：
NAD+(nmol/g質量)=x1÷W=0.59nmol/g質量。
NADH的測定：取0.1mL馬血清，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，玻璃比色皿測得吸光值后計算ΔA
測定=A測定-A對照=0.120-0.097=0.023，標準曲線y2=0.4452x-0.0008,根據標曲得出x2=0.053，NADH含量得：NADH(nmol/g質量)=x2÷W=0.53nmol/g質量。
