中文名稱 ： 輔酶Ⅰ NAD(H)/含量檢測試劑盒(WST顯色法)/100T
英文名稱 ： CoenzymeⅠNAD(H) Content Assay Kit (WST colorimetry)
產(chǎn)品包裝 ： 盒裝
產(chǎn)品規(guī)格 ： 100T/48S
儲存條件 ： -20℃
檢測方法 ： 微量法
有 效 期 ： 6個月
產(chǎn)品組成 ：
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試劑名稱
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規(guī)格
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保存條件
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酸性提取液
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液體25mL×1瓶
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2-8℃保存
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酸性提取液
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液體25mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑一
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液體6mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑二
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液體2mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑三
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液體4mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑四
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液體0.9mL×1支
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-20℃保存
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試劑五
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液體15mL×1瓶
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2-8℃保存
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NAD標(biāo)準(zhǔn)品
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粉劑×1支
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-20℃保存
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NADH標(biāo)準(zhǔn)品
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粉劑×1支
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-20℃保存
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產(chǎn)品說明：
輔酶I包括還原型和氧化型兩種形式，在生物氧化中起傳遞氫的作用。氧化型輔酶I又稱煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)是脫氫酶的輔酶，它在糖酵解、糖異生、三羧酸循環(huán)和呼吸鏈中發(fā)揮著不可替代的作用。中間產(chǎn)物會將脫下的氫遞給NAD，使之成為NADH(還原型輔酶I)。
而NADH則會作為氫的載體，在呼吸鏈中通過化學(xué)滲透偶聯(lián)的方式，合成ATP。NAD(H)在機體內(nèi)有重要的生理意義，與物質(zhì)代謝、能量代謝、抗細(xì)胞衰老、抗氧化以及一些疾病的發(fā)生密切相關(guān)。體內(nèi)輔酶I含量降低會導(dǎo)致細(xì)胞損傷或衰亡。
分別用酸性和堿性提取液提取樣本中NAD+和NADH，在1-mPMS作用下，WST-1可與NADH反應(yīng)，產(chǎn)生水溶性formazan，在450nm下有特征吸收峰，而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH，進一步采用WST-1檢測。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、低溫離心機、水浴鍋，研缽/勻漿器、超聲破碎儀、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、冰和蒸餾水。
注意事項：
1、反應(yīng)過程中注意避光。
2、如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進行測定。同步修改計算公式。
實驗實例：
1、NAD+的測定：稱取0.1g冬青葉片，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，玻璃比色皿測得吸光值后計算ΔA測定=A測定-A對照=0.119-0.106=0.013，標(biāo)準(zhǔn)曲線y1=0.373x+0.0012,根據(jù)標(biāo)曲得出x1=0.032，NAD+含量得：
NAD+(nmol/g質(zhì)量)=x1÷W=0.32nmol/g質(zhì)量。
NADH的測定：稱取0.1g冬青葉片，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，玻璃比色皿測得吸光值后計算ΔA測定=A測定-A對照=0.172-0.128=0.044，標(biāo)準(zhǔn)曲線y2=0.1479x,根據(jù)標(biāo)曲得出x2=0.297，NADH含量得：
NADH(nmol/g質(zhì)量)=x2÷W=2.97nmol/g質(zhì)量。
2、NAD+ 的測定：稱取0.1g小鼠肝臟，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，玻璃比色皿測得吸光值后計算ΔA測定=A測定-A對照=0.119-0.105=0.014，標(biāo)準(zhǔn)曲線y1=0.373x+0.0012,根據(jù)標(biāo)曲得出x1=0.034，NAD+ 含量得：
NAD+(nmol/g質(zhì)量)=x1÷W=3.4nmol/g質(zhì)量。
NADH的測定：稱取0.1g小鼠肝臟，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，玻璃比色皿測得吸光值后計算ΔA測定=A測定-A對照=0.145-0.112=0.033，標(biāo)準(zhǔn)曲線y2=0.1479x,根據(jù)標(biāo)曲得出x2=0.223，NADH含量得：
NADH(nmol/g質(zhì)量)=x2÷W=2.23nmol/g質(zhì)量。
3、NAD+的測定：取0.1mL馬血清，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，玻璃比色皿測得吸光值后計算ΔA測定=A測定-A對照=0.114-0.097=0.017，標(biāo)準(zhǔn)曲線y1=0.373x+0.0012,根據(jù)標(biāo)曲得出x1=0.042，NAD+含量得：
NAD+(nmol/g質(zhì)量)=x1÷W=0.42nmol/g質(zhì)量。
NADH的測定：取0.1mL馬血清，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，玻璃比色皿測得吸光值后計算ΔA測定=A測定-A對照=0.142-0.135=0.007，標(biāo)準(zhǔn)曲線y2=01479,根據(jù)標(biāo)曲得出x2=0.047，NADH含量得：NADH(nmol/g質(zhì)量)=x2÷W=0.47nmol/g質(zhì)量。
