英文名稱 ： Total Protein Thiol Content Assay Kit
產(chǎn)品包裝 ： 盒裝
產(chǎn)品規(guī)格 ： 50T/48S
儲存條件 ： 2-8℃
檢測方法 ： 可見分光光度法
有 效 期 ： 6個月
產(chǎn)品組成 ：
|
試劑名稱
|
規(guī)格
|
保存條件
|
|
提取液一
|
液體 40 mL×1 瓶
|
2-8℃保存
|
|
提取液二
|
液體 40 mL×1 瓶
|
2-8℃保存
|
|
試劑一
|
液體 125 mL×1 瓶
|
2-8℃保存
|
|
試劑二
|
液體 20 mL×1 瓶
|
2-8℃保存
|
|
試劑三
|
液體 18 mL×1 瓶
|
2-8℃保存
|
|
試劑四
|
液體 3 mL×1 瓶
|
2-8℃保存
|
|
粉劑一
|
粉劑×1 瓶
|
2-8℃保存
|
|
標準品
|
粉劑×1 支
|
2-8℃保存
|
產(chǎn)品說明：
巰基的存在使得蛋白質(zhì)能夠進行二硫鍵的形成，從而維持分子的穩(wěn)定性和功能性。巰基還參與到氧化還原反應中，具有重要的生物學作用。在細胞內(nèi)，巰基含量的變化與多種疾病的發(fā)生和進展密切相關(guān)，因此巰基也成為了生物醫(yī)學領(lǐng)域中的重要研究對象。
本試劑盒測定的是蛋白質(zhì)二硫鍵斷裂產(chǎn)生的巰基和本身游離巰基的總和。還原劑會使二硫鍵裂解生成巰基，巰基會發(fā)生親核反應，即巰基與5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸(DTNB)反應，生成黃色化合物，在412nm處有吸收峰，據(jù)此可以計算蛋白質(zhì)總巰基含量。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、低溫離心機、 研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、丙酮(AR）、蒸餾水。
注意事項：
若樣本ΔA測定<0.01，可適當增大樣本量后測定，注意同步修改空白管和標準管及計算公式；若樣本ΔA測定>1.5，可用試劑一稀釋沉淀溶解液后測定，注意同步修改計算公式中的稀釋倍數(shù)。
實驗實例：
1、取100μL馬血清，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得ΔA測定=A測定-A對照=0.557-0.038=0.519，
ΔA標準=A標準-A空白=0.633-0.076=0.557，按樣本質(zhì)量計算蛋白質(zhì)總巰基含量得：
蛋白質(zhì)總巰基含量(μmol/mL)= 2.5×ΔA測定÷ΔA標準=2.329μmol/mL。
2、取0.1036g鼠肝，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得ΔA測定=A測定-A對照=0.727-0.111=0.616，ΔA標準=A標準-A空白=0.633-0.076=0.557，按樣本質(zhì)量計算蛋白質(zhì)總巰基含量得：蛋白質(zhì)總巰基含量(μmol/g質(zhì)量)=0.25×ΔA測定÷ΔA標準÷W×F=2.669μmol/g質(zhì)量。
3、取0.1078g黃豆粉，沉淀溶解液用試劑一稀釋2倍后，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得ΔA測定=A測定-A對照=1.080-0.068=1.012，ΔA標準=A標準-A空白=0.633-0.076=0.557，按樣本質(zhì)量計算蛋白質(zhì)總巰基含量得：蛋白質(zhì)總巰基含量(μmol/g質(zhì)量)=0.25×ΔA測定÷ΔA標準÷W×F=8.427μmol/g質(zhì)量。
