英文名稱 ：Pyruvate(PA) Content Assay Kit
產(chǎn)品包裝 ：盒裝
產(chǎn)品規(guī)格 ：50T/48S
儲(chǔ)存條件 ：2-8℃
檢測方法 ：可見分光光度法
有 效 期 ：6個(gè)月
產(chǎn)品組成：
|
試劑名稱
|
規(guī)格
|
保存條件
|
|
提取液
|
液體60 mL×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
試劑一
|
液體7 mL×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
試劑二
|
液體30 mL×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
標(biāo)準(zhǔn)品
|
液體1 mL×1支
|
2-8℃保存
|
產(chǎn)品說明：
丙酮酸通過乙酰 CoA 連接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代謝，起著重要的樞紐作用。丙酮酸與 2,4-二硝基苯肼作用， 生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，在堿性溶液中呈櫻紅色。
技術(shù)指標(biāo)：
最低檢出限：0.001μmol/mL
線性范圍：0.0015-0.25μmol/mL
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
注意事項(xiàng)：
1. 如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測定。
2. 提取液中含有蛋白變性成分， 若使用蛋白濃度計(jì)算需要另取樣本提取測定。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
1. 稱取約0.1171g兔肝，加入1mL提取液，進(jìn)行冰浴勻漿，靜置30min ，8000g，常溫離心10min，取上清待測。 之后按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計(jì)算ΔA測定=A測定管-A空白管=0.570-0.101=0.469 ，ΔA標(biāo)準(zhǔn) =A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.541-0.101 =0.440，計(jì)算丙酮酸含量得：
PA(μmol/g 質(zhì)量)=0.125×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W =1.138μmol/g 質(zhì)量
2. 稱取約0.1094g合歡，加入1mL提取液，進(jìn)行冰浴勻漿，靜置30min ，8000g，常溫離心10min，取上清用蒸餾水稀釋2倍后待測。之后按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計(jì)算ΔA測定=A測定管-A空白管=0.886- 0.101=0.785 ，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.541-0.101 =0.440，計(jì)算丙酮酸含量得：
PA(μmol/g質(zhì)量)=0.125×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×稀釋倍數(shù)=4.077μmol/g質(zhì)量
3. 取50μL兔血清之后按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計(jì)算ΔA=A測定管-A空白管=0.146-0.101=0.045， ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.541-0.101 =0.440，計(jì)算丙酮酸含量得：
PA(μmol/mL)=0.1375×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)=0.014μmol/mL
