一、基本信息

細(xì)胞名稱

K562-LUC/人慢性骨髓性白血病細(xì)胞系-熒光素酶標(biāo)記

細(xì)胞編號

JN-CC2504

細(xì)胞品牌

紀(jì)寧生物

細(xì)胞規(guī)格

1x10?cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管

種屬來源

人

組織來源

骨髓

細(xì)胞形態(tài)

淋巴母細(xì)胞樣

細(xì)胞簡介

Luciferase K-562細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)螢火蟲熒光素酶。該細(xì)胞株性狀穩(wěn)定，培養(yǎng)時不需要添加抗生素維持?？捎米魑灮鹣x熒光素酶活性檢測中的陽性對照，也可用于活體動物成像實驗。K-562細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。連續(xù)細(xì)胞株K-562是由Lozzio從一位臨終的53歲女性慢性骨髓性白血病患者的胸水中建立。K-562細(xì)胞被歸入高度未分化的粒性白細(xì)胞類，Erson等對其表面膜性質(zhì)的研究表明，K-562細(xì)胞是一株人類紅白血病細(xì)胞。K-562細(xì)胞在自然殺傷分析中廣泛作為高敏感的體外受體，See Pross等將K-562細(xì)胞用于NK細(xì)胞的體外詳細(xì)檢測，包括NK細(xì)胞活性的數(shù)學(xué)量化。K-562母細(xì)胞是多能性造血惡性細(xì)胞，它能自發(fā)分化成可識別的紅血球祖細(xì)胞、粒性白細(xì)胞、單核細(xì)胞等。K-562細(xì)胞是EBNA陰性的。

puro藥篩濃度

K-562-LUC細(xì)胞puro藥篩濃度為0.5ug/ml，培養(yǎng)過程中可不用再添加puro，如若擔(dān)心抗性隨著傳代時間降低，可定期用0.2ug/ml濃度puro維持

細(xì)胞代數(shù)

10代以內(nèi)

生物安全等級

1

生長特性

懸浮生長

生長條件

氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

保藏機(jī)構(gòu)

ATCC; CCL-243 BCRC; 60007 BCRJ; 0126 CCLV; CCLV-RIE 0439 DSMZ; ACC-10 ECACC; 89121407

培 養(yǎng) 基

RPMI-1640+10% FBS+PS

凍存條件

無血清凍存液，液氮儲存

細(xì)胞貨期

現(xiàn)貨，1周左右

發(fā)貨方式

復(fù)蘇發(fā)貨（T25瓶免運(yùn)輸費(fèi)用）/  凍存發(fā)貨（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)用）

供應(yīng)范圍

僅限于科研實驗使用，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

Ｔ25瓶

收貨處理

觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁，將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-4h，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)

傳代密度

細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)

傳代比例

首次傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿

傳代方法

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心3-5min分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:4的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注意事項

1. 運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。

2. 因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。

凍存管

收貨處理

到細(xì)胞后，需立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇

傳代密度

第二天換液并檢查細(xì)胞密度

傳代比例

一管細(xì)胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶

傳代方法

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后輕輕吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

注意事項

1. 收貨時若發(fā)現(xiàn)干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細(xì)胞接種觀察，若未融化可以將細(xì)胞按正常步驟保存。

2. 為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞。

三、細(xì)胞凍存操作

凍存液配方

無血清凍存液，液氮儲存

細(xì)胞密度

待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例

凍存方法

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項

凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實驗方案

四、售后服務(wù)

細(xì)胞予重發(fā)

1.細(xì)胞運(yùn)輸中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)。

2.收到細(xì)胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)。

3.收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)。

4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置2小時后，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，經(jīng)核實后，重發(fā)。

5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置22小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實后，重發(fā)。

6.細(xì)胞活性問題，請在收到產(chǎn)品3天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)。

細(xì)胞不重發(fā)

1.客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)。

2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

4.細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)。

5.細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)。

6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)。

五、特別說明

上海紀(jì)寧生物客戶購買本公司的細(xì)胞過程中，有任何技術(shù)問題或?qū)嶒瀱栴}，都可以撥打我們的免費(fèi)服務(wù)電話15800441226 / 021-54721350，我們隨時給予技術(shù)中／實驗中的免費(fèi)解答。