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產(chǎn)品詳情

大鼠精原細胞
基本信息
產(chǎn)品名稱 ： 大鼠精原干細胞
產(chǎn)品品牌 ： 紀(jì)寧生物
組織來源 ： 睪丸組織
產(chǎn)品規(guī)格 ： 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

細胞簡介

大鼠精原細胞分離自睪丸組織；睪丸呈微扁的卵圓形，表面光滑，覆蓋著鞘膜臟層；深部是質(zhì)地堅韌的白膜，在睪丸后緣增厚并進入睪丸，形成睪丸縱膈，縱膈發(fā)出許多睪丸小隔深入睪丸實質(zhì)，將實質(zhì)分為睪丸小葉，數(shù)量約為100～200。每個小葉內(nèi)約有2～4條生精小管具有產(chǎn)生精子的作用；生精小管之間的結(jié)締組織中有睪丸間質(zhì)細胞，具有產(chǎn)生雄激素的作用。生精小管首先匯合成為精直小管(也稱直精小管)，精直小管進入睪丸縱膈形成睪丸網(wǎng)，之后睪丸網(wǎng)發(fā)出12～15條輸出小管通過睪丸后上緣進入附睪。生精小管的生精上皮是精子產(chǎn)生的地方，由生精細胞和支持細胞構(gòu)成，成人的生精小管有30～70cm 長。

精子的產(chǎn)生過程包括生精細胞的分化、支持細胞的作用、雄激素的調(diào)節(jié)等。生精細胞并不是一種細胞，它是多種細胞的統(tǒng)稱，包括精原細胞、初級精母細胞、次級精母細胞、精子細胞、精子。前者依次發(fā)育分化為后者，且依次從生精上皮的基部到管腔面排列，最終形成精子進入到管腔之中，并借助生精上皮外側(cè)的肌樣細胞的收縮作用向下一級管腔移動。精原細胞是指由睪丸精子管上皮的原始生殖細胞經(jīng)過多次有絲分裂而形成的細胞。原始的胚細胞經(jīng)分化形成精原細胞，精原細胞經(jīng)復(fù)制形成初級精母細胞，初級精母細胞經(jīng)過減數(shù)第一次分裂后形成次級精母細胞，再經(jīng)過減數(shù)第二次分裂形成精細胞。

精細胞經(jīng)過變形最終形成精子。精原細胞屬于雄性生殖細胞的早期發(fā)育階段，能不斷地進行有絲分裂，增加細胞數(shù)量，并分化為精母細胞。精原細胞貼近基膜，細胞呈圓形，核大而圓，梁色深。精原細胞在男性的一生中具有幾乎無限分裂的能力，而且分裂過程中能夠保持原有的基因性狀  不變。在增殖過程中，通過精原細胞的分裂和分化，由精原細胞產(chǎn)生精母細胞，進入成熟 分裂，因而通過增殖可大大增加精母細胞的數(shù)量。

按理論推算，一個精原細胞通過數(shù)次細 胞分裂，可形成上百個初級精母細胞。但在生精過程早期，生精細胞很易發(fā)生變性，故實 際上少于這個數(shù)字。在精原細胞的增殖過程中，有一部分Ad型精原細胞不再繼續(xù)分裂， 而是保留下來，成為新的精原干細胞，因此通過增殖不僅能使精原干細胞不斷得到更新， 且能使精原干細胞保持一定數(shù)量，從而使精子的產(chǎn)生持續(xù)地進行下去，不會枯竭。

方法簡介

紀(jì)寧生物實驗室分離的大鼠精原細胞采用混合酶多步消化法制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶 。

質(zhì)量檢測

紀(jì)寧生物實驗室分離的大鼠精原細胞經(jīng)A P (堿性磷酸酶)免疫組化染色鑒定，純度可達90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息

培 養(yǎng) 基 ： 含F(xiàn)BS、生長添加劑、G D N F、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：  每2-3天換液一次
生長特性 ：  貼壁
細胞形態(tài) ：  圓形、橢圓形
傳代特性 ：  可傳2-3代
傳代比例 ：  1:2
消 化 液 ：  0.25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ：  氣相：空氣，95% ；C O2，5%
大鼠精原細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用紀(jì)寧生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片

使用方法

大鼠精原細胞是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈圓形、橢圓形，在紀(jì)寧生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作

1. 取出T 25細胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1) 收集T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50ml離心管中，用吸管吸取PBS，吹洗細胞培養(yǎng)瓶1-2次，收集清洗液；經(jīng)1200-1500rpm 離心3min，棄上清，收集細胞沉淀①。
2) 添加0.25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，收集細胞懸液至離心管中；經(jīng)1200-1500rpm 離心3min，棄上清，收集細胞沉淀②。
4) 吸取5ml新鮮完全培養(yǎng)基，重懸細胞沉淀①、細胞沉淀②,把①、②混勻。
5) 用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞，按實驗需求接種于實驗器皿內(nèi)，然后補充適量新鮮的
完全培養(yǎng)基，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
6) 待細胞狀態(tài)穩(wěn)定后，用于實驗；可以每2-3天換液一次新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1m g/m l），明膠（0.1% ），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

大鼠精原干細胞

注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和紀(jì)寧生物技術(shù)部溝通。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們紀(jì)寧系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
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