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兔視網膜色素上皮細胞

品牌:紀寧生物

貨號:JN25045

規(guī)格: 5×10?Cells

聯(lián)系方式:021-54721350

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產品詳情

兔視網膜色素上皮細胞
基本信息

產品名稱 : 兔視網膜色素上皮細胞

產品品牌 : 紀寧生物

組織來源 : 視網膜組織

產品規(guī)格 : 5×105cells/T 25細胞培養(yǎng)瓶


細胞簡介

兔視網膜色素上皮細胞分離自視網膜組織。視網膜居于眼球壁的內層,是一層透明的薄膜。視網膜由色素上皮層和視網膜感覺層組成,兩層間在病理情況下可分開,稱為視網膜脫離。色素上皮層與脈絡膜緊密相連,由色素上皮細胞組成,它們具有支持和營養(yǎng)光感受器細胞、遮光、散熱以及再生和修復等作用。


組織學上視網膜分為10層,由外向內分別為:色素上皮層、視錐、視桿細胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內顆粒層、內叢狀層、神經節(jié)細胞層、神經纖維層、內界膜。視網膜內層為襯于血管膜內面的一層薄膜,有感光作用。后部鼻側有一視神經乳頭。視網膜上的感覺層是由三個神經元組成。


第一神經元是視細胞層,專司感光,它包括錐細胞和桿細胞。視桿細胞主要在離中心凹較遠的視網膜上,而視錐細胞則在中心凹處最多。第二層叫雙節(jié)細胞,約有10到數(shù)百個視細胞通過雙節(jié)細胞與一個神經節(jié)細胞相聯(lián)系,負責聯(lián)絡作用。第三層叫節(jié)細胞層,專管傳導。


視網膜是一層菲薄的但又非常復雜的結構,它貼于眼球的后壁部,傳遞來自視網膜感受器沖動的神經纖維跨越視網膜表面,經由視神經到達出口。視網膜的分辨力是不均勻的,在黃斑區(qū),其分辨能力最強。視網膜色素上皮(RPE) 位于脈絡膜和光感受器細胞外節(jié)之間,是視網膜下腔和脈絡膜血管之間的離子、水、營養(yǎng)物質和代謝終產物轉運通道。主要是由單層色素上皮細胞所構成,排列十分規(guī)則。


視網膜色素上皮參與視黃醇循環(huán),吞噬脫落的光感受器細胞外節(jié)以維持光感受器細胞興奮性,并分泌多種生長因子,幫助維持脈絡膜血管內皮細胞和光感受器細胞的結構完整性。細胞呈多角形,細胞分為三部分,即頂部、體部和基  底部。視網膜色素上皮細胞無再生能力,細胞死亡后不被替換,而是鄰近的細胞向側面滑動,以填補死亡細胞遺留下來的空間。


視網膜色素上皮位于脈絡膜和光感受器細胞外節(jié)之間,是視網膜下腔和脈絡膜血管之間的離子、水、營養(yǎng)物質和代謝終產物轉運通道。視網膜色素上皮參與視黃醇循環(huán),吞噬脫落的光感受器細胞外節(jié)以維持光感受器細胞興奮性,并分泌多種生長因子,幫助維持脈絡膜血管內皮細胞和光感受器細胞的結構完整性。


方法簡介

紀寧生物實驗室分離的兔視網膜色素上皮細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法,并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細胞總量約為5×105cells/瓶。


質量檢測

紀寧生物實驗室分離的兔視網膜色素上皮細胞經PC K 免疫熒光鑒定,純度可達90% 以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。


培養(yǎng)信息

包被條件 : 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm 2)

培 養(yǎng)  基 : 含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等

換液頻率 : 每2-3天換液一次

生長特性 : 貼壁

細胞形態(tài) : 上皮細胞樣

傳代特性 : 可傳2-3代

傳代比例 : 1:2

消 化  液 : 0. 25% 胰蛋白酶

培養(yǎng)條件 : 氣相 :空氣,95% 。C O2,5%

兔視網膜色素上皮細胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用紀寧生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。


細胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片


使用方法

兔視網膜色素上皮細胞是一種貼壁細胞,細胞形態(tài)呈上皮細胞樣,在紀寧生物技術部標準操作流程下,細胞可傳2-3代。建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。


客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作

1. 取出T 25細胞培養(yǎng)瓶,用75% 酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

2. 貼壁細胞消化

1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次。

2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中,輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。

3) 用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5m L,置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

4) 待細胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

3. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性,貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0. 1m g/m l),明膠(0. 1% ),依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。


兔視網膜色素上皮細胞
注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和紀寧生物技術部溝通。由于運輸?shù)脑?,個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

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