9076-44-2 / 胰凝乳蛋白酶抑制劑的應(yīng)用

背景及概述^[1]

胰凝乳蛋白酶，又叫糜蛋白酶，是一種典型的絲氨酸蛋白酶，脊椎動物的消化酶。和胰蛋白酶抑制劑類似，胰凝乳蛋白酶抑制劑也能降低蛋白質(zhì)在腸道內(nèi)的降解，導(dǎo)致氨基酸和肽的生成受到影響，從而影響生物的正常代謝。馬鈴薯塊莖中含有0.6%~2.1%（濕基）蛋白，其中蛋白酶抑制劑大約占一半，其分子量介于5~25kDa。在馬鈴薯塊莖中，蛋白酶抑制劑的作用是作為貯存蛋白和調(diào)節(jié)內(nèi)源蛋白酶的活性。

另外，蛋白酶抑制劑對草食性昆蟲和致植物病的真菌也具有。創(chuàng)傷和水分脅迫可以促使馬鈴薯塊莖分泌蛋白酶抑制劑。胰凝乳蛋白酶對抑制劑非常敏感，但胰凝乳蛋白酶抑制劑具有熱不穩(wěn)定性。因此，有必要確保馬鈴薯濃縮蛋白應(yīng)用于食品工業(yè)的時候，應(yīng)將蛋白酶抑制劑進(jìn)行滅活。也正是由于這個原因，馬鈴薯濃縮蛋白沒有在食品工業(yè)中得到很好的應(yīng)用。

來源^[1]

南非刺桐（Erythrinacaffra），大豆（Glycinemax），棉豆（Phaseoluslunatus），花生（Arachishypogaea），硬皮豆（Macrotylomaaxillare），豇豆（Vignaunguiculata），馬鈴薯（Solanumtuberosum），印度黑綠豆（blackgram），鷹嘴豆（chickpea），木豆（pigeonpea），菜豆（Phaseolusvulgaris），四棱豆（Psophocarpustetragonolobus），蠶豆（Viciafaba），班巴拉花生（Vignasubterranea），赤小豆（Vignaumbellata）等植物中都含有豐富的胰凝乳蛋白酶抑制劑。

應(yīng)用^[2-4]

胰凝乳蛋白酶抑制劑(ChymotrypsinInhibitor，CI)廣泛存在于微生物、豆科植物、禾本科植物、節(jié)肢動物和哺乳動物等的體內(nèi)，主要作用是停止、阻止或降低胰凝乳蛋白酶活性。胰凝乳蛋白酶(chymotrypsin)又叫糜蛋白酶，是一種典型的絲氨酸蛋白酶，在生物體的多種組織和器官中發(fā)揮著非常重要的作用，也是一些病原生物或腫瘤細(xì)胞的重要病原因子。

有研究開發(fā)了一種防治非組胺依賴的慢性癢的藥物，通過皮膚干燥引起的非組胺依賴的慢性癢動物模型，研究角質(zhì)層胰凝乳蛋白酶抑制劑對小鼠癢覺的抑制作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明慢性癢動物模型實(shí)施7天后，能夠引起小鼠明顯的抓撓反應(yīng)，而采用胰凝乳蛋白酶抑制劑能夠顯著抑制小鼠的抓撓反應(yīng)。

并且通過大量實(shí)驗(yàn)篩選出由ChymostatinA(抑糜酶素A)、ChymostatinB(抑糜酶素B)和ChymostatinC(抑糜酶素C)組成的混合小肽作為胰凝乳蛋白酶抑制劑，用于防治非組胺依賴的慢性癢，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明具有很好的防治非組胺依賴的慢性癢功效，安全性好，副作用小，值得推廣和應(yīng)用。

制備一種板藍(lán)根活性蛋白，該板藍(lán)根活性蛋白中含有胰蛋白酶抑制劑、胃蛋白酶抑制劑和α-胰凝乳蛋白酶抑制劑。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明提供的板藍(lán)根活性蛋白具有明顯的抗多種原因所致胰腺炎的作用；并且采用MTT法和荷瘤小鼠研究板藍(lán)根活性蛋白對不同腫瘤的抑制作用，研究結(jié)果表明本發(fā)明板藍(lán)根活性蛋白具有顯著的抗腫瘤活性和提高免疫力功效，具有開發(fā)治療胰腺炎和抗腫瘤藥物的前景。

制備^[5]

馬鈴薯胰凝乳蛋白酶抑制劑的制備包括以下幾步：

①抽提：新鮮馬鈴薯洗凈切碎于7克/升的二亞硫酸鈉水洛液浸泡30分鐘。

去上清液，再加管數(shù)入50毫升相同溶液，置入組織搗碎機(jī)攪至勻漿。過濾，濾液調(diào)至pH3.0，離心，收集離心液。

②鹽折：5℃下，于離心液中加入固體硫酸錢至70%飽和度，攪拌l小時，離心、沉淀懸浮于同一飽和度的硫酸按中，室溫下用whatmaln號濾紙過濾并洗滌。沉淀溶于蒸餾水中今攪拌，過濾，保留濾液。

③熱處理：濾液置70℃水浴5分鐘，過濾，濾液待透析。

④透折：濾液入透折袋，置冰箱內(nèi)對蒸餾水透折48小時，其間更換數(shù)次蒸餾水。過濾，濾液冷凍干燥成粉。

⑤分離：SephadexG-75凝膠用0.05M，pHs.ZTris·HCI起始緩沖液(內(nèi)含0.1MKCI)熱溶月張，減壓去氣泡后裝柱(20x50厘米)。平衡。20毫克冷凍干粉溶于5毫升緩沖液，離心，上柱。以起始緩沖液洗脫，流速60毫升/小時，分部收集5毫升。測280cm處各管收集液的光吸收值，得洗脫曲線圖。分別收集峰I和峰l，冷凍干燥。

主要參考資料

[1] 馬鈴薯胰凝乳蛋白酶抑制劑活力的測定

[2] CN201410549248.3一種來源于單環(huán)刺螠的胰凝乳蛋白酶抑制劑及其基因和其重組蛋白的應(yīng)用

[3] CN201610023681.2防治非組胺依賴的慢性癢的藥物及其應(yīng)用

[4] CN201710257641.9板藍(lán)根活性蛋白及其制備方法與應(yīng)用

[5] 馬鈴薯胰凝乳蛋白酶抑制劑的制備和性質(zhì)