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肝素實際上就是一種含有硫酸基團的粘多糖,發(fā)現(xiàn)于肝臟,具有強負電荷、強酸性的特點,主要從豬小腸黏膜或者牛肺中提取。肝素可加快凝血酶失活,提高其親和力,對血小板的聚集有抑制作用,能增強蛋白C活性,對血管新生的調控作用較強,同時還能起著抗過敏、抗炎的作用。臨床上較為常見的肝素鹽包括肝素鈉、肝素鋰,其中由于肝素鈉的成本低不利于鈉離子檢測,應用價值低于肝素鋰。
研究表明,肝素鋰抗凝血漿與血清中TP、ASO、UA、ALT、Mg、Cl、TC、CRP 檢測結果比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。肝素鋰抗凝血漿與血清中HBD、LDH、TBA 檢測結果比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。因此除HBD、LDH、TBA 外,肝素鋰抗凝血漿與血清之間的相關性較好。因此,在生活檢測中采用肝素鋰抗凝血漿代替血清的可行性較高,可將其作為一種重要的檢測方法。
肝素,在臨床血液檢驗中以鈉鹽和鋰鹽為常見,具有獨特的應用價值,肝素螯合力低,對水分子運動的影響小,對血液成分干擾少,不影響紅細胞體積,不引起溶血,所以在多種以全血或血漿為標本的檢驗中,推薦使用肝素作為抗凝劑。適用于紅細胞脆性試驗、血氣分析、紅細胞壓積實驗、血流變及急診生化測定。 在對ph值、血氣、電解質和鈣離子的檢測中,肝素是唯一可以使用的抗凝劑,而肝素鋰在檢測非鋰離子時產(chǎn)生干擾的可能性最小,所以推薦使用肝素鋰作為抗凝劑,目前在血液檢驗中,肝素鋰正在逐步取代肝素鈉。
1. 用于血液透析后病人生化檢驗:血液透析后病人的血液樣本是很多醫(yī)院檢驗科所要面臨的一種特殊樣本,許多檢驗人員面對此類樣本時常常感到束手無策。這是因為透析病人在血液透析過程中,使用了含有肝素的抗凝藥物如低分子肝素鈣等,此時由于血液中含有一定量的肝素抗凝藥物,血液抽取后置于普通管或分離膠/促凝劑管中均極不容易凝固,不易分離出血清。
有報道稱用肝素鋰抗凝血漿與血清檢測血K,其檢測結果分析有偏倚,可能為血樣在離心過程中轉速過高,纖維蛋白絲網(wǎng)羅的血塊中的紅細胞受擠壓破壞溶血,紅細胞內的K 離子釋放至血清所致。另血液樣本在轉運和凝固過程中難免有少量的紅細胞破壞,造成血K 的輕度偏高。
另有報導用肝素鋰抗凝血漿與血清檢測CK-MB、LDH、GLU等結果有顯著差異,可能系標本有溶血或放置時間過長血糖分解之故。相反,肝素抗凝劑有不影響細胞體積,不易造成溶血的優(yōu)點,不需要水浴放置,可直接離心。肝素鋰抗凝血漿測得的血K、GLU、LDH等,準確地說更接近病人體內的真實濃度。因此,盡快建立血漿生化檢驗參考值體系,有助于臨床醫(yī)生對患者病情作出準確判斷。
2. 用于常規(guī)生化檢:研究結果表明,大部分常規(guī)生化檢驗項目可用肝素鋰抗凝血漿代替血清,但Glu、K+、Na+、CI-、P3-應建立血漿參考范圍,其余項目可用血清參考范圍解釋血漿檢測結果;Lp (a)、PA、HBDH、LDH、CK、CKMB、IgM 等項目不宜用肝素鋰抗凝血漿樣本進行測定,血漿Lp(a)隨著肝素濃度增大而增大。
肝素鋰的制備,目前國內公開了離子平衡交換法制備肝素鋰,該法部分工藝環(huán)節(jié)需要低溫條件(10℃以下)操作,對物料及環(huán)境溫度控制要求較高,硬件設施投入較大;該法在去蛋白工藝環(huán)節(jié)采用強酸性條件操作(PH1.5),對肝素活性損失較大(肝素溶液在低PH值環(huán)境下很不穩(wěn)定,極易降解失活),影響最終活性收率和效價,可操作性不強;該法采用超濾濃縮分離技術,超濾設備昂貴,硬件投入較大;該法采用的離子平衡交換方式,是以高濃度鋰離子不斷介入的方式來實現(xiàn)肝素鈉 向肝素鋰的轉換,無法保證動態(tài)離子平衡轉換的充分性和連續(xù)穩(wěn)定性。
國外制備肝素鋰均采用離子交換法,該法需要選用精品肝素鈉為原料,原料成本高,而且在離子交換過程中可引起PH急 劇下降,嚴重影響產(chǎn)品的收率和效價,并且交換過程需要在低溫提條件下進行,導致肝素鋰生產(chǎn)硬件設施投入較大,生產(chǎn)成本較高。
有研究提供一種肝素鋰制備方法,以解決上述問題。它是以下列步驟制備:
1)粗品肝素酶解:將粗品肝素鈉溶解,調PH值為7.5?9.0,升溫至50?55℃,加入肝素酶解胰酶,保溫4?5小時,調PH值 9.0?11,升溫至85℃~90℃后,冷卻,過濾去除沉淀物,濾液用乙醇沉淀,收集沉淀物(A);
2)去蛋白:步驟1所得沉淀物(A)用水溶解,攪拌,調 PH至9?11,加入蛋白質絮凝沉淀劑,攪拌,靜置,過濾去除沉淀,收集濾液(D),濾液(D)調PH至11?13值,攪拌,靜置,過濾去除沉淀,收集濾液(E),濾液(E)調PH值至中性,用乙醇沉淀,收集沉淀物(B);
3)氧化脫色:將步驟2所得沉淀物(B)用水溶解,用過氧 化氫氧化24?48小時,調整PH至10.5?11.5后,過濾去除沉淀物,收集濾液(F),濾液(F)調PH值至6.5?7.5,用乙醇沉淀,收集 沉淀物(C);
4)樹脂交換:將步驟3所得沉淀物(C)用水溶解,加入 LiCl,攪拌溶解,通過樹脂柱進行離子交換,收集過柱流出液,得肝素鋰溶液;
5)沉淀、脫水、干燥:將步驟4所得肝素鋰溶液,過濾,用乙醇沉淀,收集沉淀物(G),沉淀物(G)脫水,然后真空干 燥,粉碎,得肝素鋰精品。
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