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無動物源性胰蛋白酶/EDTA是一種重組酶,可以替代動物胰腺來源消化塑料培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的貼壁細胞。本產品比天然胰蛋白酶制劑具有更高的特異性,適用于無血清培養(yǎng)體系中貼壁細胞的消化。本產品溶劑為PBS/1mM EDTA,是即用型產品。本品不含酚紅。
1.將無動物源性胰蛋白酶/EDTA和完全培養(yǎng)基于37℃復溫。
2.將待消化的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基上清吸棄。
3.用5 ml無鈣鎂離子的PBS清洗細胞層并棄去洗液。
4.在培養(yǎng)瓶中加入適量的無動物源性胰蛋白酶/EDTA(例:75cm2培養(yǎng)瓶中加入5ml消化液),保證貼壁細胞層完全被消化液浸沒。
5.37℃孵育,直至細胞被消化下來(使用倒置顯微鏡觀察,保證細胞完全被消化下來)可以輕拍瓶底,幫助細胞解離。
6.在培養(yǎng)瓶中加入5-10ml的完全培養(yǎng)基,各個角度傾斜培養(yǎng)瓶沖洗,然后將液體轉入15ml離心管。
7.100g離心5-10min。
8.去上清后用2-5ml復溫的完全培養(yǎng)基重懸。
9.確定細胞濃度及活率。
10.根據(jù)細胞特性以一定的濃度接種細胞,即可進行培養(yǎng)。