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酸性磷酸酶 (acid phosphatase, ACP) 是一組在酸性條件下水解磷酸單醋類化合物的酶。 ACP 存在于人體多種組織或細(xì)胞,主要有紅細(xì)胞、血小板、脾臟、骨髓以及男性的前列腺等。男性血清中 ACP大約一半來自前列腺,男性血清的其他 ACP 和女性血清 ACP主要來自骨骼破骨細(xì)胞、紅細(xì)胞等。
ACP有多種,來自前列腺的ACP稱前列腺ACP (p-ACP) , 可被右旋酒石酸抑制,其他不被酒石酸抑制,稱酒石酸抵抗 ACP(tr-ACP)。 p-ACP 升高主要與前列腺腫瘤有關(guān), tr-ACP 升高主要與骨溶解和再造有關(guān)。 ACP 測定主要采用活性測定,有多種方法。一種比色法以磷酸麝香草酚酞為底物,此底物對 p-ACP 有一定特異性,曾有較廣泛應(yīng)用。另一種方法是速率法,通過 一系列反應(yīng),連續(xù)監(jiān)測有色物質(zhì)的生成,易于自動 化,是目前常用方法。近年出現(xiàn)利用免疫分離的活性 測定方法,可特異性測定特定種類的 ACP。本節(jié)介紹目前應(yīng)用較多的速率法。
血清 ACP 在酸性條件下水解 α-萘酚磷酸酯,生成α-萘酚和磷酸, α-萘酚與固紅TR 反應(yīng)生成有色物質(zhì),在 405nm 波長處有吸收。在底物過剩的情況下,α-萘酚的生成速率與血清 ACP 放度成正比,有色物質(zhì)生成速率與α-萘酚的生成速率成正比,因而可通過監(jiān)測有色物質(zhì)升高測定血清 ACP 活性濃度。 ACP 活性測定的酶促反應(yīng)式如下:
反應(yīng)體系中加入 1,5-戊二醇等醇類物質(zhì)作為磷酸接受體,以加速磷酸酯水解??赏ㄟ^加和不加酒石酸,分別測定 tr-ACP 和總 ACP (t-ACP) 。
主要試劑成分包括α-萘酚磷酯、固紅 TR 或相似物質(zhì)、 1,5-戊二醇、枸櫞酸緩沖液等, 測定 tr-ACP 時含酒石酸,測定 t-ACP 時不含酒石酸。 各商品試劑成分相似,各成分濃度及樣品體積分?jǐn)?shù)存在一定差異,詳見各試劑說明書。
測定過程一般為,試劑與樣品棍合后溫育一段時間(如 5 分鐘) ,隨后監(jiān)測一定時間 (1 -3 分鐘)內(nèi)吸收度( 405nm 左右)變化。反應(yīng)溫度 37℃。不同實(shí)驗(yàn)室具體測定條件會因所使用的儀器和試劑而異,在保證方法可靠的前提下,應(yīng)按儀器和試劑說明書設(shè)定測定條件,進(jìn)行定標(biāo)品、空白樣品和血清樣品分析。
血清樣品 ACP催化活性濃度可按有色物質(zhì)消光系數(shù)計算或用定標(biāo)品校準(zhǔn)。
不同方法參考區(qū)間不甚一致,一般成人血清 t-ACP參考上限 7U/L 左右, tr- ACP 5U/L 左右。
血清 ACP 不穩(wěn)定,血清分離后需盡快加入適量乙酸,降低血清 pH 至 5.4 ,以穩(wěn)定 ACP。紅細(xì)胞中含大量 ACP,需盡快分離血清,溶血樣品不可用做 ACP 測定。
血清 tr-ACP 主要是一個溶骨活動指標(biāo), Paget 病、甲狀旁腺功能亢進(jìn)、骨腫瘤或腫瘤骨轉(zhuǎn)移、骨石化癥等情況時血清 tr-ACP 可升高。與骨無關(guān)的一種血清 tr-ACP 升高的情況是 Gaucher 病, 毛細(xì)胞白血病的毛細(xì)胞表達(dá) tr-ACP,毛細(xì)胞白血病時 tr-ACP 是組織化學(xué)指標(biāo),但血清 tr-ACP 一般不升高。前列腺癌,特別是有轉(zhuǎn)移時,血清 ACP 或 p-ACP 明顯升高。血清 ACP 或 p-ACP 曾廣泛用于前列腺癌診斷或監(jiān)測,但目前已基本被前列腺特異性抗原 (PSA) 取代。