手機掃碼訪問本站
微信咨詢
9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺（簡稱Fmoc-ONSu）是一種無色或淺黃色針狀晶體，分子式C19H15NO5，分子量337.3。9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺主要用于多肽合成的產(chǎn)品中用于保護氨基酸的加工，其是氨基酸和蛋白質(zhì)之間的一種有機化合物，通過對多肽的合成過程研究發(fā)現(xiàn)其已經(jīng)成為當前生物化學領域的重要研究方向之一。
現(xiàn)有的多肽合成普遍采用固相或合成法，其一方面進行合成時原材料消耗好大且合成設備價格昂貴，加工合成效率低、純度低，合成反應過程較復雜、不易分離；另一方面合成所使用的設備價格昂貴，生產(chǎn)成本投入較高，無法滿足中小企業(yè)進行加工合成的需求。因此，基于上述問題，CN201310271359.8提供一種用于9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺制備方法。
本發(fā)明目的為克服上述現(xiàn)有技術的不足，提供一種用于9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺制備方法，一方面能夠極大的提高合成生產(chǎn)效率、合成產(chǎn)品純度，另一方面合成所使用的設備價格適中，能夠滿足中小企業(yè)要求。
技術方案：本發(fā)明提供一種用于9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺制備方法，包括以下步驟，
步驟1、首先將質(zhì)量比為1:3-4的芴甲氧羰酰氯甲酸酯和琥珀酸亞氨水溶液
作為原料，然后將反應溫度控制在40℃-60℃，緩慢攪拌反應10m-30m即得到反應液；
步驟2、在步驟1的反應液中加入無機堿并攪拌反應，其中無機堿為碳酸鈉或碳酸氫鈉質(zhì)量比是琥珀酸亞氨水溶液的2-4倍；
步驟3、將步驟3制得的反應溶液進行過濾、洗滌、烘干后即得9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺，其中烘干溫度為30℃-80℃。
優(yōu)選的所述步驟1中芴甲氧羰酰氯甲酸酯溶液的濃度為7％-10％。
優(yōu)選的所述步驟1中琥珀酸亞氨水溶液的濃度為6％-9％。
優(yōu)選的所述步驟1中反應溫度為45℃-55℃，反應時間15 m -20 m。
優(yōu)選的所述步驟2中無機堿為碳酸鈉或碳酸氫鈉質(zhì)量比是琥珀酸亞氨水溶液的2.5-3倍。
優(yōu)選的所述步驟3中烘干溫度為50℃-60℃。
與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果在于：
本發(fā)明的一種用于9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺制備方法，解決了現(xiàn)有加工合成效率低、純度低和方法復雜的的問題，能夠快速、簡單的加工合成出純度高的9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺：同時加工合成所使用的設備價格適中，滿足了中小企業(yè)加工合成需要，降低了企業(yè)生產(chǎn)成本投入。
9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺是有機合成的重要原料，目前主要用作肽合成和抗血栓類藥物中間體。目前對Fmoc-ONSu的合成和應用的研究報道較多，但還沒有公開資料介紹Fmoc-ONSu的分析方法。盡管已有文獻或?qū)＠岬紽moc-ONSu合成產(chǎn)物的液相色譜含量，但對液相色譜的詳細操作條件都沒有公開，對于采用哪種類型的高效液相色譜柱及具體操作條件都有待詳細摸索。
目前常用的方法是進行柱前或柱后衍生，即試樣先和衍生化試劑反應生成穩(wěn)定的具有紫外生色團或熒光團的衍生化產(chǎn)物，再通過紫外光或熒光檢測器獲得相應的響應，從而可檢測出試樣的實際含量。這種方法雖然理論上可以用來測定Fmoc-ONSu的真實含量，但衍生劑稀少，操作手續(xù)繁瑣，有較大缺陷。
為了克服現(xiàn)有技術的缺陷，提供一種操作方便、測定準確的液相色譜檢測方法，本發(fā)明公開了一種9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺純度的液相色譜測定方法。
本發(fā)明通過如下技術方案達到發(fā)明目的：
一種9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺純度的液相色譜測定方法，采用高效液相色譜儀操作，其特征是：按如下方法依次實施：
a. 設置高效液相色譜儀：高效液相色譜儀的色譜柱作為固定相，固定相為反相鍵合固定相，即色譜柱的填料選用十八烷基鍵合相硅膠、辛烷基鍵合相硅膠和氰基鍵合相硅膠中的任意一種，填料的粒徑不大于5μm，色譜柱的長度為10cm～50cm，色譜柱的內(nèi)徑為4mm～5mm；
高效液相色譜儀的流動相選用水、乙腈、四氫呋喃、環(huán)己烷、正己烷、乙醚、二氯甲烷、三氯甲烷和甲苯中的任意一種；
高效液相色譜儀的檢測器采用多波長可變紫外-可見光檢測器，檢測器所發(fā)射的紫外線的波長在220nm～370nm；
b. 配制標樣溶液：以色譜純的流動相為溶劑，用容量瓶等儀器將9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺的標樣配制成濃度為0.1mg/mL～1.2mg/mL的溶液作為分析用標樣，配制時用超聲波脫氣溶解并將溶液混合搖勻后作為分析用標樣；
c. 配制待測樣品溶液：以色譜純的流動相為溶劑，用容量瓶等儀器將含有9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺的待測樣品配制成濃度為0.1mg/mL～1.2mg/mL的溶液作為待分析的試樣，配制時用超聲波脫氣溶解并將溶液混合搖勻后作為分析用標樣；
d. 分析標樣：待高效液相色譜儀條件穩(wěn)定后，用高效液相色譜儀分析標樣，用50μL容量的微量注射器向高效液相色譜儀內(nèi)注入標樣，標樣各組分得以分離后，得出標樣中9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺組分的峰面積；
e. 分析試樣：待高效液相色譜儀條件穩(wěn)定后，用高效液相色譜儀分析試樣，用50μL容量的微量注射器向高效液相色譜儀內(nèi)注入試樣，試樣各組分得以分離后，得出試樣中9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺組分的峰面積；
f. 計算純度：采用外標法以標樣定量試樣的純度，待測樣品中9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺的純度，以質(zhì)量分數(shù)表示，按下式計算：
X1：試樣中9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺的純度，以百分比表示，
X0：標樣中9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺的純度，以百分比表示，
A1：試樣中9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺組分的峰面積，
A0：標樣中9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺組分的峰面積，
m1：試樣的質(zhì)量，
m0：標樣的質(zhì)量。
采用外標法分析過程快捷，方便、易操作，分析結(jié)果誤差小，得到的色譜峰峰形尖銳、對稱性好，可作為9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺合成及提純過程中的純度檢測，即適用于各種純度的9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺樣品。
[1] CN201310271359.8
[2]CN201310683256.2