81029-05-2 / 亮甲酚藍(lán)的主要應(yīng)用

背景及概述^[1]

亮甲酚藍(lán)是一種化工染料。

應(yīng)用^[1-3]

1)亮甲酚藍(lán)染色對(duì)牛核移植胚胎體外發(fā)育的影響。為研究亮甲酚藍(lán)(brilliantcresylblue，BCB)染色選擇卵母細(xì)胞對(duì)牛核移植體系的影響，本實(shí)驗(yàn)以未進(jìn)行染色處理的牛卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體(COCs)作為對(duì)照組，在成熟培養(yǎng)前用26μmol/L亮甲酚藍(lán)染色90min作為處理組，將處理組依照胞質(zhì)的顏色分為藍(lán)色組(BCB+)和無(wú)色組(BCB-)，分別在成熟培養(yǎng)后作為受體，經(jīng)胞質(zhì)內(nèi)注射法構(gòu)建牛體細(xì)胞核移植胚胎，統(tǒng)計(jì)體細(xì)胞核移植的卵裂數(shù)、囊胚數(shù)和囊胚細(xì)胞數(shù)來評(píng)價(jià)其發(fā)育潛能。結(jié)果表明：BCB+組的成熟率(80.9%)與對(duì)照組(60.2%)和BCB-組(51.9%)差異顯著(P<0.05)；BCB+組的囊胚率(32.26%)與對(duì)照組(21.49%)和BCB-組(5.95%)差異顯著(P<0.05)，另外BCB+組的囊胚細(xì)胞總數(shù)(132.5)顯著高于其他組(P<0.05)。結(jié)果顯示，通過亮甲酚藍(lán)染色法篩選出成熟的高質(zhì)量牛卵母細(xì)胞用于體細(xì)胞核移植，可以獲得更高的克隆囊胚率。

2)亮甲酚藍(lán)染色法評(píng)價(jià)斑馬魚卵母細(xì)胞體外成熟度的實(shí)驗(yàn)研究。過不同濃度亮甲酚藍(lán)(BCB)對(duì)斑馬魚卵母細(xì)胞進(jìn)行染色，探討該方法用于判斷魚類卵母細(xì)胞成熟度的可行性，并利用該法對(duì)孕酮促斑馬魚卵母細(xì)胞體外成熟實(shí)驗(yàn)中的卵母細(xì)胞成熟情況進(jìn)行了判斷和分析。結(jié)果表明：(1)BCB染色法用于判斷魚類卵母細(xì)胞成熟度是可行的。(2)低濃度(1nmol/L和10nmol/L)孕酮處理6h，對(duì)斑馬魚卵母細(xì)胞的成熟并無(wú)明顯促進(jìn)作用，高濃度的孕酮(100nmol/L和1000nmol/L)不利于卵母細(xì)胞的成熟。(3)濃度為100nmol/L的孕酮處理12h，對(duì)卵母細(xì)胞成熟的促進(jìn)作用顯著。

3)亮甲酚藍(lán)染色對(duì)水牛卵母細(xì)胞體外受精和孤雌激活胚胎發(fā)育的影響。探討亮甲酚藍(lán)(BCB)染色對(duì)水牛卵母細(xì)胞體外受精及孤雌激活胚胎發(fā)育的影響。卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體(COCs)在體外成熟培養(yǎng)前用濃度26μmol/L的亮甲酚藍(lán)染色90min，然后根據(jù)卵母細(xì)胞胞質(zhì)藍(lán)色的有無(wú)分為陽(yáng)性(BCB+，藍(lán)色)和陰性組(BCB-，不著色)。以未經(jīng)染色處理的COCs為對(duì)照組，控制對(duì)照組卵母細(xì)胞在含0.4%牛血清白蛋白(BSA)的杜氏磷酸鹽緩沖液(DPBS)中孵育90min。體外成熟培養(yǎng)后統(tǒng)計(jì)各組的成熟率、體外受精和孤雌激活后的發(fā)育率。結(jié)果BCB+組的成熟率(65.70%)顯著高于對(duì)照組(59.86%)、控制對(duì)照組(58.42%)和BCB-組(48.86%)。在體外受精后的囊胚發(fā)育率方面，BCB+組(27.08%)和對(duì)照組(25.49%)差異不顯著，但顯著高于控制對(duì)照組(20.50%)和BCB-組(8.45%)。在孤雌激活后的囊胚發(fā)育率方面，BCB-組顯著低于其他各組，但BCB+組、對(duì)照組以及控制對(duì)照組之間無(wú)顯著差異。亮甲酚藍(lán)染色篩選出的陽(yáng)性卵母細(xì)胞具有較好的核成熟發(fā)育潛能，但并不能顯著提高卵母細(xì)胞體外受精及孤雌激活后的胚胎發(fā)育率。

主要參考資料

[1] 亮甲酚藍(lán)染色對(duì)牛核移植胚胎體外發(fā)育的影響

[2] 亮甲酚藍(lán)染色法評(píng)價(jià)斑馬魚卵母細(xì)胞體外成熟度的實(shí)驗(yàn)研究

[3] 亮甲酚藍(lán)染色對(duì)水牛卵母細(xì)胞體外受精和孤雌激活胚胎發(fā)育的影響