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以石蠟油(培養(yǎng)油)覆蓋培養(yǎng)液用于人類受精卵和胚胎的體外培養(yǎng)已經(jīng)行之有年, 該項技術(shù)可有效避免在體外培養(yǎng)過程中培養(yǎng)液的蒸發(fā)損失，且覆蓋的石蠟油使得培養(yǎng)液和外部環(huán)境相互隔離, 有效避免溫度和pH值等在輔助生殖技術(shù)操作時產(chǎn)生波動, 保持培養(yǎng)液內(nèi)環(huán)境相對穩(wěn)定和防止污染。
然而移植前胚胎對其發(fā)育環(huán)境極為敏感，因此與培養(yǎng)液直接接觸的石蠟油也會對胚胎發(fā)育產(chǎn)生影響(石蠟油的水溶性成分可擴散到培養(yǎng)液中)，國內(nèi)研究人員為此開展了動物試驗，選取了三家廠商的四種石蠟油、觀察其對水牛孤雌胚胎體外培育的影響，結(jié)果顯示四種石蠟油對胚胎體外培育存在不同程度的影響，其中C公司石蠟油(過濾)對胚胎培育的效果最佳。
該試驗結(jié)果與早年海外的研究結(jié)果相類似，當時國外的研究人員比較了未經(jīng)洗滌和經(jīng)洗滌后的兩種石蠟油對微滴培養(yǎng)系統(tǒng)中鼠胚發(fā)育的影響，結(jié)果也顯示經(jīng)洗滌后的石蠟油組的鼠胚發(fā)育更優(yōu)。
進一步分析天然石蠟油所含成分，我們發(fā)現(xiàn)其中含有胚胎毒性物質(zhì)，這些物質(zhì)具有親水特性、易于擴散進入培養(yǎng)液中，而石蠟油的密度、黏性也會影響胚胎毒性物質(zhì)擴散進入培養(yǎng)液中的速率和量，最后由于胚胎體外培養(yǎng)往往采用微滴模式、培養(yǎng)液的用量較少而石蠟油覆蓋后的接觸面積相對較大、使得石蠟油中的胚胎毒性物質(zhì)更易于擴散進入培養(yǎng)液。
因此須對石蠟油進行洗滌和過濾，去除其中的有害成分，才能安全地使用于人類輔助生殖技術(shù)中，其品質(zhì)需經(jīng)過鼠胚試驗和人精子存活試驗的驗證。
人精子存活試驗。該試驗采用優(yōu)化處理后活力保持在90%以上的人類精子，根據(jù)待測石蠟油的功能和特性，在相應(yīng)培養(yǎng)環(huán)節(jié)使用待測石蠟油后，經(jīng)37度培養(yǎng)24 小時后與對照石蠟油組比較，觀察待測組的精子活力是否顯著下降，從而評價待測石蠟油的品質(zhì)和潛在毒性。
精子計數(shù)板、恒溫臺、光學顯微鏡、計數(shù)器、計時器、溫度計、水平式離心機、超凈工作臺、二氧化碳培養(yǎng)箱等。
重要評價指標
01. 精子活力，以前向運動精子所占全部精子的百分率表示(前向運動是指精子主動地呈線性或沿一大圓周運動，不考慮速度)；
02. 精子活力系數(shù)，經(jīng)過一定培養(yǎng)時間后的精子活力與培養(yǎng)開始時精子活力的比值，反映精子活力的變化情況；
03. 相對精子活力系數(shù)，相同培養(yǎng)時間，試驗組精子活力系數(shù)與對照組精子活力系數(shù)的比值，反映試驗組對精子活力的影響程度。