78214-33-2/人參皂苷Rh2的生物活性及其在體內(nèi)濃度分析

概述

人參皂苷Rh2是從人參中提煉出來(lái)的抗癌活性植物成分，目前已被已被越來(lái)越多的腫瘤患者所認(rèn)可，改善病人生活質(zhì)量、延長(zhǎng)生命具有很好的效果，故享有了“護(hù)命素”的美譽(yù)。護(hù)命素具體表現(xiàn)為輔助治療各類(lèi)癌癥，化學(xué)名為原人參二醇-3-氧-B-D-吡喃葡萄糖苷，即人參皂苷Rh2。

生物活性^【1】

1．抗腫瘤作用

人參皂苷Rh2能顯著抑制人肝癌細(xì)胞SMMC-7721增殖，并存在時(shí)間依賴(lài)性和濃度依賴(lài)性。10ug／mL人參皂苷Rh2作用6天的抑制率達(dá)50％；而20ug／mL人參皂苷Rh2作用4天抑制率也近50％，肝癌細(xì)胞形態(tài)及亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)向正常肝細(xì)胞方向逆轉(zhuǎn)。進(jìn)一步研究表明，人參皂苷Rh2能使SMMC-7721細(xì)胞血清甲胎蛋白合成明顯下降，分泌量從6．60％±0．30％下降到2．35％±0．06％，，γ-CT及耐熱型白蛋白(AIb)活性顯著降低，堿性磷酸酶活性及Alb分泌量顯著升高。用人參皂苷Rh2處理人肝癌SK—HEP-1細(xì)胞會(huì)使其發(fā)生明顯凋亡，在凋亡過(guò)程中c-Jun末端蛋白酶的活性隨之顯著上升，同時(shí)有Bcl一2敏感的caspase一3蛋白激酶活化。同時(shí)，人參皂苷Rh2對(duì)人肝癌細(xì)胞Bel一7404的增殖和凋亡也有一定影響。

人參皂苷Rh2可通過(guò)誘導(dǎo)p21蛋白質(zhì)表達(dá)、降低cyclin D蛋白質(zhì)水平、降低pRb磷酸化和抑制E2F釋放等機(jī)制來(lái)抑制人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7細(xì)胞的生長(zhǎng)，且抑制作用呈量效關(guān)系，可使細(xì)胞分裂停止在G1期，但其作用是可逆的。人參皂苷Rh2在體外濃度為10～60umol／L能抑制多種人類(lèi)卵巢癌細(xì)胞株的增殖，且呈劑量依賴(lài)，在IC50濃度左右可導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。

研究人參皂苷Rhz對(duì)小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞的抑制作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在10mg／L濃度下對(duì)B16細(xì)胞有較強(qiáng)的分化誘導(dǎo)作用，主要表現(xiàn)為黑色素生成能力明顯增加；形態(tài)向正常上皮樣細(xì)胞分化；細(xì)胞呈網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)；黑色素顆粒增加；生長(zhǎng)變緩慢。用濃度為10mg／L的人參皂苷Rh2處理黑色素合成的限速酶酪氨酸，4h后酪氨酸活性明顯升高，與黑色素生成能力成正比，說(shuō)明人參皂苷Rh2可誘導(dǎo)小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞向正常色素細(xì)胞分化。人參皂苷Rh2還可抑制人惡性黑色素瘤A375～S2細(xì)胞的生長(zhǎng)，其凋亡的發(fā)生部分依賴(lài)于caspase一3和caspase-8的通路。

另外，人參皂苷Rh2對(duì)前列腺癌細(xì)胞株、肺腺癌耐藥細(xì)胞、食管癌細(xì)胞和人白血病細(xì)胞等癌細(xì)胞均具有一定的誘導(dǎo)凋亡能力。

2．抗過(guò)敏作用

人參皂苷Rhz能抑制免疫球蛋白E誘導(dǎo)RBL-2H3細(xì)胞釋放β一氨基已糖苷酶(IC50為0．1mmol／L)和小鼠被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)[25mg／kg腹膜內(nèi)注射時(shí)抑制率為(88％+8．2％)]，作用強(qiáng)于色甘酸鈉。在不同的掃描測(cè)熱計(jì)上人參皂苷Rh2顯示膜穩(wěn)定作用，對(duì)脂多糖刺激RAW 264.7細(xì)胞產(chǎn)生的一氧化氮和前列腺素E2具有抑制作用。

3．免疫調(diào)節(jié)作用

人參皂苷Rh2及其化學(xué)衍生物硫酸化人參皂苷Rh2低濃度時(shí)都能促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖，高濃度時(shí)都能抑制淋巴細(xì)胞增殖，硫酸化人參皂苷Rh2顯著高于同濃度的人參皂苷Rh2；人參皂苷Rh2能顯著促進(jìn)雞外周血自然殺傷細(xì)胞的殺傷活性。研究表明人參皂苷Rh2體外能抑制免疫活性，化學(xué)修飾后的硫酸化人參皂苷Rh2體外能促進(jìn)免疫活性。

藥代動(dòng)力學(xué)^【2】

1．吸收

在人腸Caco一2細(xì)胞單層模型，人參皂苷一Rh2及其苷元原人參二醇能量依賴(lài)性被吸收，且呈時(shí)間和濃度依賴(lài)性關(guān)系，低溫降低其吸收率。當(dāng)pH=7．0時(shí)，人參皂苷一Rh2的吸收達(dá)最大；當(dāng)pH=8．0時(shí)，原人參二醇的吸收達(dá)最大。動(dòng)力學(xué)分析表明：人參皂苷一Rh2的吸收呈非飽和性，Kd=0．17nmol/h/mg蛋白，轉(zhuǎn)運(yùn)的Kd=3．95 mmol/L, Vmax=4．78nmol/h/mg蛋白；原人參二醇的吸收亦呈非飽和性，Kd=0．78nmol/h/mg蛋白。P一糖蛋白與人參皂苷一Rh2的轉(zhuǎn)運(yùn)有密切關(guān)系。其結(jié)果提示腸內(nèi)細(xì)菌對(duì)人參皂苷一Rh2的生物轉(zhuǎn)化可能影響其生物利用度。按0．1mg/kg劑量靜脈或lmg/kg劑量灌胃給予犬人參皂苷一Rh2，其在雄性犬的生物利用度為17．6％，在雌性犬的生物利用度為24．8％。 ’

2．代謝

給犬按0．1mg/kg劑量靜脈注射或按lmg/kg劑量灌胃人參皂苷一在血漿中可檢測(cè)到其代謝產(chǎn)物原人參二醇。

分析方法

1．高效液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用法分析人參皂苷一Rh2在人腸Caeo一2細(xì)胞中的濃度

儀器：日本島津高效液相色譜儀，10 Advp泵；日本島津LC—MS 2010型液相一質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)，檢測(cè)模式為電噴霧離子化方式(ESI)。 。

色譜條件：ODS色譜柱(150 mm×2．1 mm I．D．，5um)，連有C18預(yù)處理柱；流動(dòng)相為乙腈一500 mmol/L氯化銨水溶液，起始為68：32，4min；隨后為95：5。梯度流速為0．2mL/min。干燥氣流速為4．5 L/min；CDL電壓固定，CDL溫度為250℃。

2．高效液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用法分析人參皂苷一Rll2在犬血漿中的濃度

儀器和色譜條件同上法。

分析樣品的處理：取犬血漿用固相萃取柱處理，然后進(jìn)行高效液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用分析。

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：人參皂苷一Rh2在犬血漿中的檢測(cè)范圍為2．0―1250．0ng/ml。日內(nèi)和日間RSD皆小于10％，回收率大于80％。

參考文獻(xiàn)

[1] 劉斌著,中藥成分體內(nèi)代謝與分析,中國(guó)中醫(yī)藥出版社,2011.08,第251頁(yè)

[2] 楊秀偉編著,中藥成分的吸收、分布、代謝、排泄、毒性及藥效 上冊(cè),中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2006年8月,第1044頁(yè)