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組織不應直接置于液氮中，因為溫度差可能會導致組織表面沸騰，從而導致氣穴和不均勻的冷凍這可能會破裂并在形態(tài)上破壞組織。如果您有異戊烷且純度足夠高的話，還是推薦您用異戊烷進行組織冷凍的，具體方法如下：
b.將新鮮組織置于培養(yǎng)皿中，用干凈的紗布或者紙巾吸干組織周圍血水，盡量使組織表明干燥。
c.標記冷凍模具以標記組織的方向，用預冷的 OCT 填充模具，避免產(chǎn)生氣泡。
d.用鑷子將組織放入含預冷OCT的模具中，用OCT 覆蓋任何裸露組織的表面，確認沒有氣泡，尤其是在組織附近。
e.用鑷子將模具放到異戊烷中，但不要使異戊烷浸入模具內(nèi)，直到組織凍結(jié)。冷凍時間可根據(jù)組織類型和大小而變化。
f.冷凍后，將組織轉(zhuǎn)移到預冷的冷凍管中，然后放在干冰上。
g.將 OCT 包埋的組織塊保存在–80℃的密封容器中，以便長期保存，或立即進行冷凍切片
如果您的新鮮樣本打算直接進行空間轉(zhuǎn)錄組實驗，且實驗室沒有異戊烷的話百邁客在這里給您推薦直接用干冰粉進行組織冷凍包埋，具體方法如下：
b.將新鮮組織置于培養(yǎng)皿中，用干凈的紗布或者紙巾吸干組織周圍血水，盡量使組織表明干燥。
c.標記冷凍模具以標記組織的方向，用預冷的 OCT 填充模具，避免產(chǎn)生氣泡
d.用鑷子將組織放入含預冷OCT的模具中，用OCT 覆蓋任何裸露組織的表面，確認沒有氣泡，尤其是在組織附近。
e.將組織放入干冰粉中，直到組織凍結(jié)。此方法冷凍包埋組織較慢，且須在干冰粉上靜置一段時間，確保組織冷凍均勻，約需30分鐘。
f.冷凍后，將組織轉(zhuǎn)移到預冷的冷凍管中，然后放在干冰上。
g.將 OCT 包埋的組織塊保存在–80℃的密封容器中，以便長期保存，或立即進行冷凍切片。