77-52-1/熊果酸對酒精性肝損傷大鼠腸道菌群的影響

酒精性肝損傷又稱酒精性肝病，是指長期大量飲酒所致的肝損傷，也是導(dǎo)致肝癌甚至急性肝衰竭最常見的誘因之一。熊果酸（UA）是一種弱酸性五環(huán)三萜類化合物，是多種植物的主要功能成分。目前研究已發(fā)現(xiàn)UA不僅具有抗炎、抑菌、等多種生物學(xué)效應(yīng)，而且具有活性強(qiáng)、安全性高、毒性低（口服半數(shù)致死量為8330 mg/kg）等特性。

來自包頭醫(yī)學(xué)院營養(yǎng)與食品健康研究所的馬浩然、賈海蓮和包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院骨外科的張文龍等人以腸道菌群為著眼點(diǎn)，探討UA對酒精性肝損傷的保護(hù)機(jī)制。調(diào)節(jié)腸道菌群可以防止革蘭氏陰性菌的過量繁殖，進(jìn)而避免內(nèi)毒素水平過高對肝臟進(jìn)行的“二次傷害”。本研究應(yīng)用基因間重復(fù)共有序列（ERIC）-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）和PCR-變性梯度凝膠電泳（DGGE）指紋圖譜分析以及實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)等方法，探討UA對酒精性肝損傷大鼠腸道菌群的影響，以期為后續(xù)UA對酒精性肝損傷的保護(hù)作用機(jī)制研究提供可參考的依據(jù)，同時(shí)也為酒精性肝損傷的防治提供新思路。

1.UA干預(yù)對酒精暴露大鼠肝臟組織病理學(xué)改變的影響

正常對照組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝板排列整齊，肝細(xì)胞索以中央靜脈為中心呈放射狀排列；酒精模型組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)模糊，肝細(xì)胞大片性壞死，胞質(zhì)中可見大小不等、數(shù)量不一的圓形脂肪空泡，壞死區(qū)可見炎性細(xì)胞浸潤。而UA干預(yù)組肝小葉結(jié)構(gòu)雖有不同程度破壞，但與酒精模型組相比較，肝索排列逐漸恢復(fù)整齊。

2.UA干預(yù)對酒精誘導(dǎo)肝損傷大鼠血清轉(zhuǎn)氨酶活力的影響

酒精模型組血清轉(zhuǎn)氨酶水平明顯高于正常對照組（P＜0.05），而UA干預(yù)組較酒精模型組ALT和AST活力均顯著降低（P＜0.05）。

3.UA對酒精性肝損傷大鼠血漿中D-LA濃度和內(nèi)毒素水平的影響

大鼠給予50%酒精連續(xù)灌胃8周后，酒精模型組大鼠血漿D-LA濃度和內(nèi)毒素水平顯著高于正常對照組（P＜0.05），分別為正常對照組的1.6、1.5倍；而UA干預(yù)后可明顯抑制酒精所致的血漿D-LA濃度和內(nèi)毒素水平的升高（P＜0.05）。

4.大鼠腸道菌群ERIC-PCR指紋圖譜分析

酒精模型組大鼠腸道菌群明顯區(qū)別于空白對照組大鼠，在1000 bp左右有清晰明亮的條帶1，而UA干預(yù)組該條帶則較暗，接近正常水平；約在250 bp處空白組較酒精模型組有較亮的條帶2，UA干預(yù)組該條帶亮度介于二者之間。

5.大鼠糞便總DNA PCR-DGGE指紋圖譜分析

對各組大鼠糞便微生物總DNA16S rDNA V3可變區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增及1%的瓊脂糖凝膠電泳， 產(chǎn)物長度為220 bp。將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行DGGE得到指紋圖譜， 進(jìn)行UPGMA聚類分析，可見酒精模型組與其他兩組相似系數(shù)僅為0.21，UA干預(yù)組與正常對照組相似系數(shù)為0.46。酒精模型組大鼠腸道菌群多樣性明顯下降且與正常組的相似性較低，而UA干預(yù)組大鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)與正常組大鼠更相似。

6.糞便中特定菌株的定量分析

與正常對照組比較，酒精模型組大鼠糞便中大腸桿菌和糞腸球菌數(shù)量均明顯增多（P＜0.05）；而UA干預(yù)組大腸桿菌和糞腸球菌數(shù)量較酒精模型組顯著減少（P＜0.05），且與正常對照組大鼠間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。此外，酒精模型組大鼠糞便中長雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌數(shù)量與正常對照組相比均顯著降低（P＜0.05），而UA干預(yù)后可以明顯抑制這種變化，使兩種腸道菌群更趨近于正常對照組。

結(jié)論

蘇木精-伊紅染色病理學(xué)觀察顯示，酒精模型組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)模糊，脂肪變性及炎性浸潤增多；與酒精模型組相比，UA干預(yù)組肝組織損傷程度明顯得到改善，且血清轉(zhuǎn)氨酶活力明顯降低（P＜0.05）。此外，UA的補(bǔ)充顯著抑制了酒精引起的血漿D-乳酸濃度及內(nèi)毒素水平升高（P＜0.05）。ERIC-PCR和PCR-DGGE結(jié)果顯示，UA干預(yù)改善了酒精所致腸道菌群結(jié)構(gòu)的紊亂，使其朝著正常組大鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)方向趨近。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示，UA干預(yù)組大鼠腸道內(nèi)長雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌含量明顯高于酒精模型組（P＜0.05），大腸桿菌和糞腸球菌含量較酒精模型組顯著減少（P＜0.05），且均接近于正常對照組。因此，適量地補(bǔ)充UA能夠有效改善酒精引起的大鼠肝臟損傷，其作用機(jī)制可能與UA調(diào)節(jié)酒精引起的腸道菌群結(jié)構(gòu)和數(shù)量的改變、改善腸道微生態(tài)有關(guān)。

來源:《食品科學(xué)》2018年39卷11期146-151頁

作者：馬浩然、賈海蓮、張文龍、王晶、張男男、李可欣、邰大鵬、戈娜。