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角鯊烯是由6個(gè)異戊二烯連接而成的高度不飽和的直鏈三萜類化合物，別名鯊萜、三十碳六烯、魚肝油萜或角鯊油素，系統(tǒng)命名為2,6,10,15,19,23-六甲基-2,6,10,14,18,22-二十四碳六烯，分子式為C30H50，常溫下為淡黃色或無色油狀液體。角鯊烯具有提高缺氧耐受力功能、抑制微生物生長(zhǎng)、抗菌消炎、調(diào)節(jié)膽固醇代謝等生物活性功效。而且角鯊烯是一種具有抗衰老、抗癌作用的無毒性的強(qiáng)化劑。角鯊烯來源廣泛，存在于微生物、植物種籽、微藻、鯊魚肝臟及人體皮脂中。
一種從裂殖壺菌中提取角鯊烯的方法，包括以下步驟：
S1、裂殖壺菌的培養(yǎng)：
S11、將裂殖壺菌轉(zhuǎn)接于斜面，于25℃下培養(yǎng)3～4d，將裂殖壺菌活化，然后用接種環(huán)挑取活化的裂殖壺菌，接入一級(jí)種子培養(yǎng)基中以25℃、200r/min培養(yǎng)2d，得到一級(jí)種子，最后再取一級(jí)種子接入二級(jí)種子培養(yǎng)基中，以25℃、200r/min培養(yǎng)2d，得到二級(jí)種子；其中，一級(jí)種子培養(yǎng)基和二級(jí)種子培養(yǎng)基均由30g/L葡萄糖、10g/L酵母提取物和15g/L礦物質(zhì)組成；礦物質(zhì)由10g/LNaCl、0.5g/LCaCl2·2H2O、1.5g/LMgSO4·7H2O、1.25g/LK2SO4、0.75g/LKH2PO4、0.7g/L(NH4)2SO4和0.3g/LFeSO4·7H2O組成；
S12、將二級(jí)種子按照6％的接種量轉(zhuǎn)入發(fā)酵機(jī)構(gòu)中的發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，罐壓0.025MPa，通氣量5L/min，攪拌速度40r/min，發(fā)酵6d，得到發(fā)酵液；其中，發(fā)酵培養(yǎng)基由120g/L葡萄糖、10g/L酵母提取物、30g/L礦物質(zhì)和0.15g/L復(fù)合維生素組成，礦物質(zhì)由18g/LNaCl、1.5g/LCaCl2·2H2O、3.5g/LMgSO4·7H2O、2.25g/LK2SO4、1.75g/LKH2PO4、2g/L(NH4)2SO4和1g/LFeSO4·7H2O組成，復(fù)合纖維素由60mg/L維生素B6、30mg/L維生素B12、20mg/L核黃素、10mg/L煙酸和30mg/L葉酸組成；在發(fā)酵培養(yǎng)過程中分批流加葡萄糖，每隔8～12h加一次，每次加30g/L；
S2、裂殖壺菌的破壁：
將步驟S12得到的發(fā)酵液轉(zhuǎn)入酶解機(jī)構(gòu)中，往其加入堿性蛋白酶，對(duì)裂殖壺菌進(jìn)行酶解破壁，酶解溫度為63℃，pH為7.8，酶解時(shí)間為6h；
S3、角鯊烯的提?。?/p>
S31、在步驟S2破壁后得到的菌液中加入無水乙醇，菌液和無水乙醇的體積比為1：1.2，經(jīng)過離心機(jī)構(gòu)振蕩離心分離除去上清液水-乙醇相，收集底層菌泥；
S32、在底層菌泥中加入正己烷，底層菌泥和正己烷的體積比為1：1.15，經(jīng)離心機(jī)構(gòu)振蕩離心收集上清液，重復(fù)若干次，直到上清液無色透明，最后蒸發(fā)去除正己烷，收集得到角鯊烯粗品；
S4、角鯊烯的純化：
將步驟S3得到的角鯊烯粗品進(jìn)行脫膠、脫酸、漂白和脫臭處理，得到純化的角鯊烯。
a、取新鮮油茶籽300公斤，用清水洗凈、涼干、切碎后置入提取罐中；
b、向罐中加入1.5-2.4噸85％的乙醇(重量含量)，加熱(溫度為60-70℃)回流提取2-3小時(shí)，濾出浸提液，另加入1.5-2.4噸85％的乙醇(重量含量)，又煮沸浸提2-3小時(shí)，濾出浸提液后棄渣；合并兩次浸提液，備用；
c、將上述備用的浸提液加熱(溫度為60-70℃)濃縮，回收乙醇，收集濃縮液200升備用；
d、向上述備用的濃縮液中加入0.4-1.0mol/L的氫氧化鈉-甲醇溶液(氫氧化鈉的用量為0.3-0.8公斤，甲醇的用量為20升)共20升，然后，將其置于70℃的水浴中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下回流反應(yīng)4小時(shí)，冷卻6小時(shí)，溶液與沉淀分離，甲酯化反應(yīng)完成，濾出混合液備用；
e、將上述備用的混合液經(jīng)0.01mol/L配位劑-硼砂反應(yīng)，采用大孔樹脂色譜分離純化，并采用50-70％乙醇(重量含量)洗脫，乙醇的用量為2個(gè)柱體積，然后收集乙醇洗脫液備用；
f、將上述備用的乙醇洗脫液在60-70℃條件下加熱濃縮，回收乙醇，得無乙醇濃縮液200升備用；
g、向上述備用的無乙醇濃縮液中加入200-400升的石油醚，常溫萃取0.5-1小時(shí)，濾出萃取液；再加入200-400升的石油醚，常溫萃取0.5-1小時(shí)，濾出萃取液，然后，合并兩次萃取液備用；
h、將上述備用的萃取液用400-800升的清水分為2-3次進(jìn)行洗滌，洗滌后，收集上清液(即：石油醚溶液)備用；
i、將上述備用的上清液(即：石油醚溶液)在30-40℃條件下加熱濃縮，回收石油醚，得角鯊烯粗油8公斤備用；
j、將上述備用的角鯊烯粗油進(jìn)行超臨界CO2萃取，得角鯊烯精油(大約為1公斤左右)，備用；
k、將上述制得的角鯊烯精油用氣相色譜法測(cè)試，若角鯊烯含量≥80％，即為成品，若角鯊烯含量≤80％，則重復(fù)上述第j步驟。
L、當(dāng)上述制得的角鯊烯精油中的角鯊烯含量≥80％后，即可用于制作茶油角鯊烯軟膠囊：
①取明膠、甘油、水按1.0∶0.4∶0.6的比例(重量配比)制備成膠囊殼，備用；
②按重量百分比份額分別取：
角鯊烯含量≥80％的角鯊烯精油87份、聚乙二醇4005份、蜂蠟3份、磷脂5份，合計(jì)為100份，混合均勻，灌裝于膠囊殼中，即制得茶油角鯊烯軟膠囊成品。
一種絡(luò)合提取角鯊烯的工藝，該方法包括如下步驟：
(1)備料：將1kg新鮮油茶樹的種仁，用清水洗去表面附著的污物，去皮殼破碎；所得物與石油醚按1:5質(zhì)量比混合超聲(160W，30min，3次)，合并提取液，過濾，經(jīng)減壓濃縮獲得山茶油脂溶性物質(zhì)濃縮液(其中角鯊烯含量10g/L)；
(2)提?。簩⒉襟E(1)得到的山茶油脂溶性物質(zhì)濃縮液與氫氧化鈉的甲醇溶液混合，50℃水浴加熱、攪拌回流2h，其中，氫氧化鈉濃度0.7mol/L，山茶油脂溶性物質(zhì)濃縮液與氫氧化鈉的甲醇溶液的體積比為1：20，通過皂化和甲酯化反應(yīng)除去脂肪酸，再用石油醚提取角鯊烯，即角鯊烯粗品；
(3)絡(luò)合：將步驟(2)得到的角鯊烯粗品(其中，角鯊烯含量8200μg/mL)和0.6mol/L硝酸銀-65v/v％甲醇水溶液等體積混合，使得角鯊烯粗品中的角鯊烯與硝酸銀的摩爾比為1：30；在0℃下，振蕩或攪拌進(jìn)行絡(luò)合反應(yīng)12h；
(4)解離：低溫下，靜置、分液，獲得中間產(chǎn)物銀離子-角鯊烯絡(luò)合物的水溶液，即絡(luò)合后的水相，加入等體積石油醚；在50℃恒溫水浴鍋中加熱回流，解離反應(yīng)80min；得到較純的含角鯊烯有機(jī)溶液；
(5)純化：將步驟(4)得到的較純的含角鯊烯石油醚溶液，用6.15mol/LNaCl水溶液清洗，在50℃，0.05Mpa條件下減壓蒸餾，回收石油醚；再次蒸餾水清洗后，在20℃、500mmHg條件下真空干燥7h，即得到5.2g角鯊烯精品，其含量接近93％，總收率88.3％。
[1][中國(guó)發(fā)明]CN202111006960.5一種從裂殖壺菌中提取角鯊烯的方法及角鯊烯在保濕抗衰老化妝品中的應(yīng)用
[2][中國(guó)發(fā)明]CN201110027119.4以油茶籽為原料提取角鯊烯的方法及茶油角鯊烯軟膠囊
[3][中國(guó)發(fā)明,中國(guó)發(fā)明授權(quán)]CN201410375211.3一種絡(luò)合提取角鯊烯的工藝