761439-42-3 / NVP-TAE684的活性研究

背景及概述^[1]

5-氯-N2-[2-甲氧基-4-[4-(4-甲基-1-哌嗪基)-1-哌啶基]苯基]-N4-[2-[(1-甲基乙基)磺?；鵠苯基]-2,4-嘧啶二胺即NVP-TAE684，是一種選擇性有效抑制ALK激酶，作用于其他激酶則沒有明顯的交叉反應(yīng)。NVP-TAE684有效抑制Ba/F3 NPM-ALK細胞增殖，IC50為3nM，1μM NVP-TAE684對Ba/F3細胞存活沒有效果。NVP-TAE684也抑制表達NPM-ALK人類ALCL細胞系的增殖，包括Karpas-299和SU-DHL-1，IC50為2-5nM。分子模型顯示L258可能為NVP-TAE684的主要激酶選擇性影響因素之一。用NVP-TAE684處理，快速且持久地抑制NPM-ALK的磷酸化作用。NVP-TAE684作用于表達NPM-ALK的Ba/F3細胞和ALCL病患細胞系，誘導細胞凋亡，且使細胞周期停在G1期。NVP-TAE684作用于H3122 CR細胞，顯著克服細胞抗Crizotinib的特性，含有融合致癌基因Eml4-ALK，降低細胞生長，抑制ALK磷酸化作用和誘導細胞凋亡。30nM NVP-TAE684可抑制mALK R1279Q突變表達誘導的神經(jīng)突增生。

對EML4-ALK陽性肺癌細胞株H2228作用的研究^[1]

廣西醫(yī)科大學蘇翠云進行了ALK抑制劑克唑替尼（Crizotinib）及TAE684（NVP-TAE684）對EML4-ALK融合基因陽性人肺癌細胞株H2228增殖和凋亡的影響,為臨床用藥提供依據(jù)。材料和方法：從廣東省人民醫(yī)院肺癌研究所獲得EML4-ALK融合基因陽性人非小細胞肺癌細胞株H2228并按常規(guī)培養(yǎng)至對數(shù)生長期。查閱文獻,了解克唑替尼及TAE684在既往實驗中的半抑制濃度（half maximal inhibitory concentration, IC50）值,設(shè)置MTT法中藥物的濃度梯度,采用MTT法分別分析克唑替尼和TAE684處理72h后H2228細胞的生長增殖情況。采用流式細胞技術(shù)分析克唑替尼處理24、48、72h后H2228細胞凋亡的情況。采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行單因素ANOVA分析,計算細胞生長抑制率,p<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義；進行回歸、Probit分析,選取95%可信區(qū)間,計算各藥物對H2228細胞株的IC50。結(jié)果：克唑替尼使H2228細胞發(fā)生早期凋亡,抑制其細胞增殖。在濃度為10nM/L、30nM/L、90nM/L、270nM/L、810nM/L的濃度下,克唑替尼對H2228細胞的抑制率分別為3.39%、10.51%、22.06%、29.60%、80.23%,抑制作用隨藥物濃度增加而增加（p<0.05）?？诉蛱婺釋2228細胞的IC50為334.51nM/L。在濃度為335nM/L的克唑替尼作用下,處理24h、48h、72h的H2228細胞早期凋亡率分別為95.3%、90.0%及68.8%,凋亡率隨時間的延長而降低（p<0.01）。未經(jīng)藥物處理及經(jīng)克唑替尼處理24h、48h、72h的H2228細胞的壞死率分別為0.1%、2.8%、2.0%、0.6%。藥物處理后細胞凋亡率與處理前無明顯差別（p>0.05）。TAE684不能抑制H2228細胞的增殖。結(jié)論：克唑替尼對EML4-ALK陽性細胞株H2228有明顯抑制作用,且抑制作用隨藥物濃度增加而增加?？诉蛱婺釋2228細胞的半抑制濃度IC50為334.51nM/L。同一藥物濃度下,克唑替尼對H2228細胞的抑制作用隨時間的延長而降低?？诉蛱婺釋2228細胞的作用主要為發(fā)生早期凋亡,對細胞的壞死無明顯作用。TAE684在本實驗中未表現(xiàn)出對H2228細胞的抑制作用。

參考文獻

[1]蘇翠云. 克唑替尼、TAE684對EML4-ALK陽性肺癌細胞株H2228作用的研究[D].廣西醫(yī)科大學,2013.