75607-67-9 / 磷酸氟達(dá)拉濱的制備

概述^[1]

磷酸氟達(dá)拉濱，化學(xué)名稱9-β-D-阿拉伯呋喃糖基-2-氟腺嘌呤-5'-磷酸酯，用于治療慢性淋巴細(xì)胞白血病。磷酸氟達(dá)拉濱的合成通常以鳥苷為起始物料，通過多步反應(yīng)合成氟達(dá)拉濱，而后與三氯氧磷進(jìn)行酯化反應(yīng)得到。磷酸氟達(dá)拉濱，是一種抗代謝的氟化嘌呤核苷類似物，它對(duì)淋巴細(xì)胞有高度的選擇性，它能夠抑制處于靜止期細(xì)胞DNA的修復(fù)及處于分裂期細(xì)胞DNA的合成，并且具有促進(jìn)這些細(xì)胞凋亡的作用，已顯示出良好療效，目前被廣泛的運(yùn)用于治療各種血液系統(tǒng)疾病，尤其是慢性淋巴細(xì)胞白血病。磷酸氟達(dá)拉濱是通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡來提高疾病的緩解率。其促凋亡的方式主要是通過調(diào)節(jié)以下幾種途徑達(dá)到的：死亡受體途徑，線粒體途徑，P53，神經(jīng)酰胺，Bcl一2家族及一些凋亡促進(jìn)子和凋亡抑制子。

制備^[1][3]

凍干粉針：

于配液罐中加入注射用水1530ml，配液罐溫度為10℃，再加入50g磷酸氟達(dá)拉濱，充分?jǐn)嚢韬?，加入適量5mol/L氫氧化鈉溶液并攪拌，直至磷酸氟達(dá)拉濱完全溶解；再加入40g甘露醇，攪拌使藥液成澄明溶液；用5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)藥液pH值至7.7，補(bǔ)加注射用水270ml，混勻。

向澄明溶液中加入活性炭5.4g，攪拌吸附30分鐘后，用0.45μm微孔濾膜采用邊脫碳邊循環(huán)的方式過濾脫碳、0.2μm濾膜一次除菌過濾及0.2μm濾膜二次終端除菌過濾，所得濾液至藥液瓶?jī)?nèi)，供灌裝用。

濾液分裝，每瓶含有磷酸氟達(dá)拉濱25mg，半加塞，放入凍干機(jī)中進(jìn)行冷凍干燥，冷凍干燥分為預(yù)凍、一次干燥和二次干燥三個(gè)階段；

預(yù)凍階段：將擱板溫度以將擱板溫度以0.5℃/min的速度降至-3℃，保溫0.5小時(shí)，再以0.72℃/min的速度降至-30℃，停止降溫，保溫1小時(shí)，緩慢升溫至-5℃，保溫1小時(shí)，再以0.72℃/min的速度降溫至-45℃，繼續(xù)保溫4小時(shí)，抽真空至箱內(nèi)真空度達(dá)10pa；

一次干燥階段：擱板溫度采用階梯式升溫，升溫-保溫交替進(jìn)行，每升溫10分鐘，接著保溫5分鐘，升溫的速率為0.34℃/min，待溫度升至-3℃時(shí)，繼續(xù)保溫4小時(shí)；

二次干燥階段：將擱板溫度以0.55℃/min的速度升至18℃，保溫1小時(shí)，擱板繼續(xù)以0.2℃/min的速度升至40℃，待二次干燥中的制品的溫度達(dá)35℃后，繼續(xù)保溫3小時(shí)。

整個(gè)凍干過程結(jié)束，全壓塞，檢測(cè)合格后出箱。

膠囊劑：

磷酸氟達(dá)拉濱溶

1.藥效學(xué)特性解在pH6.0水溶液中，將此溶液在微晶纖維素小丸上包衣，最后將包 衣小丸外包胃溶防潮薄膜衣，增重0.3％，裝入膠囊殼中即得。

藥理作用^[2]

本品為抗病毒藥阿糖腺苷的氟化核苷酸類似物，即9－β－D－阿拉伯酸－呋喃基腺嘌呤（ara－A），可相對(duì)地抵抗腺苷脫氨基酶的脫氨基作用。

磷酸氟達(dá)拉濱被快速地去磷酸化成為氟達(dá)拉濱（2F－ara－A），后者可以被細(xì)胞攝取，然后被細(xì)胞內(nèi)的脫氧胞苷激酶磷酸化后成為有活性的三磷酸鹽2F－ara－ATP。該代謝產(chǎn)物可以通過抑制核苷酸還原酶、DNA聚合酶α、δ和Σ，DNA引物酶和DNA連接酶從而抑制DNA的合成。此外，還可以部分抑制RNA聚合酶Ⅱ從而減少蛋白的合成。

雖然對(duì)于2F－ara－ATP的作用機(jī)理在某些方面還不十分清楚，推斷主要是通過影響DNA、RNA和蛋白質(zhì)的合成而抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，其中抑制DNA的合成是其主要作用。另外，體外研究顯示，慢性淋巴細(xì)胞白血病（CLL）的淋巴細(xì)胞用2F－ara－A處理后，出現(xiàn)廣泛的DNA斷裂和以凋亡為特征的細(xì)胞死亡。

安全性資料

1）全身毒性

在急性毒性研究中，高出治療劑量?jī)蓚€(gè)數(shù)量級(jí)的單劑量磷酸氟達(dá)拉濱可以引起嚴(yán)重的中毒癥狀或死亡。與細(xì)胞毒藥物所預(yù)測(cè)的一樣，骨髓、淋巴器官、胃腸道粘膜、腎臟和男性性腺受到影響。在患者中，在接近所推薦的治療劑量時(shí)（3—4倍）曾觀察到嚴(yán)重的不良反應(yīng)，其中包括重度神經(jīng)毒性，并且部分可造成致命性的后果（見“藥物過量”）。

高于臨界劑量的磷酸氟達(dá)拉濱多次給藥后的全身毒性研究也在快速增殖的組織中顯示出預(yù)期的作用。隨著用藥劑量和用藥時(shí)間的增加，形態(tài)學(xué)改變加重，但是一般認(rèn)為觀察到的改變是可逆的。原則上，已有的磷酸氟達(dá)拉濱治療經(jīng)驗(yàn)表明，其在人體具有相似的毒理學(xué)特點(diǎn)，盡管在患者身上曾觀察到其他的不良反應(yīng)，例如神經(jīng)毒性（見“不良反應(yīng)”）。

2）胚胎毒性

動(dòng)物胚胎毒性研究結(jié)果表明，磷酸氟達(dá)拉濱有致畸的可能性。鑒于與其它主要是干擾分化過程的抗代謝藥物一樣，在動(dòng)物致畸劑量和人體治療劑量之間只有很小的安全范圍，因此注射用磷酸氟達(dá)拉濱的治療使用與其對(duì)人體的致畸作用相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)。

3）潛在的遺傳毒性，致癌性

對(duì)磷酸氟達(dá)拉濱的研究發(fā)現(xiàn)，在姐妹染色體交換實(shí)驗(yàn)中其可引起DNA損傷；在體外細(xì)胞遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)中其可引起染色體的異常；在小鼠體內(nèi)微核實(shí)驗(yàn)其可增加微核率。但是在基因突變的實(shí)驗(yàn)和雄性小鼠的主要致死實(shí)驗(yàn)卻是陰性結(jié)果。因此，磷酸氟達(dá)拉濱的致突變可能性主要表現(xiàn)在體細(xì)胞，而不是在生殖細(xì)胞。

已知的磷酸氟達(dá)拉濱在DNA水平的作用和致突變實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，使人們有理由推測(cè)磷酸氟達(dá)拉濱有致癌的可能性。由于注射用磷酸氟達(dá)拉濱治療導(dǎo)致繼發(fā)腫瘤風(fēng)險(xiǎn)增加的推測(cè)只能用流行病學(xué)資料加以證實(shí)，因此沒有開展直接研究磷酸氟達(dá)拉濱致腫瘤作用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。

4）局部耐受性

靜脈注射磷酸氟達(dá)拉濱的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在注射部位沒有明顯的局部刺激反應(yīng)。甚至在注射部位不當(dāng)?shù)那闆r下，如靜脈旁、動(dòng)脈內(nèi)和肌肉內(nèi)注射含7.5mg/mL磷酸氟達(dá)拉濱的水溶液，也沒有出現(xiàn)相應(yīng)的局部刺激反應(yīng)。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，口服或靜脈注射磷酸氟達(dá)拉濱后均觀察到類似的胃腸道損害。這一發(fā)現(xiàn)支持磷酸氟達(dá)拉濱引起的腸炎是一種全身性作用的假設(shè)。

藥代動(dòng)力學(xué)^[2]

1.氟達(dá)拉濱（2F－ara－A）血漿和尿液藥代動(dòng)力學(xué)

迄今已對(duì)靜脈快速推注、短時(shí)間輸注及繼之連續(xù)靜脈輸注和口服磷酸氟達(dá)拉濱（2F－ara－AMP）后氟達(dá)拉濱（2F－ara－A）的藥代動(dòng)力學(xué)進(jìn)行了研究。2F－ara－A在CLL和Lg-NHL患者中顯示出相似的藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)。在腫瘤患者中，沒有發(fā)現(xiàn)2F－ara－A藥代動(dòng)力學(xué)和治療療效之間存在明確的相關(guān)性。出現(xiàn)的中性白細(xì)胞減少癥和紅細(xì)胞壓積改變提示，磷酸氟達(dá)拉濱的細(xì)胞毒性以劑量依賴的方式抑制造血。

1）分布和代謝

2F－ara－AMP是氟達(dá)拉濱（2F－ara－A）的水溶性前體藥物，在人體內(nèi)可以被快速定量地脫磷酸化為核苷酸2F－ara－A。另外一種代謝產(chǎn)物，2F－ara－次黃嘌呤在狗中是主要的代謝產(chǎn)物，而在人體中僅僅觀測(cè)到微量。給CLL患者單次劑量輸注2F－ara－AMP25mg/m2 30分鐘，輸注結(jié)束時(shí)，2F－ara－A達(dá)到平均血漿峰濃度3.5－3.7μM。輸注第5個(gè)劑量后，相應(yīng)的2F－ara－A濃度有中度的蓄積，輸注結(jié)束時(shí)，平均血漿峰濃度達(dá)到4.4－4.8μM。在5天的治療方案中，2F－ara－A血漿谷濃度增加了大約2倍。經(jīng)過數(shù)個(gè)治療周期后的2F－ara－A的蓄積可以被排除。高峰后水平下降分3個(gè)時(shí)相。初始相半衰期約為5分鐘，中間相半衰期為1－2小時(shí)，終末相半衰期約為20小時(shí)。

通過2F－ara－A藥代動(dòng)力學(xué)研究之間的比較得出，2F－ara－A平均血漿總清除率（CL）是79ml/min/m2（2.2ml/min/kg），平均分布容積（Vss）是83l/m2（2.4l/kg），個(gè)體間的數(shù)據(jù)差異很大。靜脈注射磷酸氟達(dá)拉濱后，2F－ara－A血漿濃度和血漿濃度時(shí)間曲線下面積（AUC）增加均與藥物劑量呈線性關(guān)系，而半衰期、血漿清除率和分布容積保持不變，與提示有劑量線性關(guān)系的藥物劑量無關(guān)。

2）清除

2F－ara－A主要靠腎臟排出，靜脈注射劑量的40－60%通過尿液排出。在實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物中用 H－2F－ara－AMP進(jìn)行的藥物總出入量實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，從尿液中可以完全回收放射性標(biāo)記物。

3）患者特點(diǎn)

腎功能不全的患者出現(xiàn)總清除率下降，說明需要減少藥物的劑量。人體血漿蛋白的體外研究顯示，2F－ara－A沒有顯著的蛋白結(jié)合傾向。

2.三磷酸氟達(dá)拉濱細(xì)胞內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)

2F－ara－A能被主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)到白血病細(xì)胞內(nèi)，在細(xì)胞內(nèi)它首先被再磷酸化為單磷酸鹽，隨后是雙磷酸鹽和三磷酸鹽。三磷酸鹽2F－ara－ATP是細(xì)胞內(nèi)主要的代謝產(chǎn)物，也是目前已知的唯一有細(xì)胞毒作用的代謝產(chǎn)物。CLL患者白血病淋巴細(xì)胞中的2F－ara－ATP濃度達(dá)峰中位時(shí)間是4小時(shí)，峰濃度差異顯著，中位值約為20μM。白血病細(xì)胞內(nèi)的2F－ara－ATP水平遠(yuǎn)高于血漿中2F－ara－A的峰值，這表明藥物在靶位點(diǎn)蓄積。白血病淋巴細(xì)胞體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)顯示，細(xì)胞外的2F－ara－A暴露（包括2F－ara－A的濃度和培養(yǎng)時(shí)間）與細(xì)胞內(nèi)2F－ara－ATP的濃度呈線性關(guān)系。2F－ara－ATP從靶細(xì)胞清除的中位半衰期是15和23小時(shí)。

藥物相互作用^[2]

1.在一項(xiàng)臨床研究中，磷酸氟達(dá)拉濱合用噴司他?。撗蹩赂Ｃ顾兀┲委熾y治性慢性淋巴細(xì)胞白血?。–LL）時(shí)，出現(xiàn)了高發(fā)生率的致命性肺毒性。因此，在使用本品時(shí)不推薦合用噴司他丁。

2.磷酸氟達(dá)拉濱的治療效果會(huì)被雙嘧達(dá)莫及其他腺苷吸收抑制劑所減弱。

主要參考資料

[1][中國(guó)發(fā)明,中國(guó)發(fā)明授權(quán)] CN201110036856.0 一種磷酸氟達(dá)拉濱凍干粉針劑及其制備方法

[2]注射用磷酸氟達(dá)拉濱說明書

[3][中國(guó)發(fā)明] CN201210069049.3 一種含磷酸氟達(dá)拉濱的膠囊劑及其制備方法