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全世界抗藥性瘧疾日漸增多，已有70%以上的惡性瘧疾原蟲對(duì)現(xiàn)有抗瘧藥如氯喹、氯酚喹、氯胍、乙胺嘧啶和甲氯喹及其復(fù)方等，在使用中均產(chǎn)生了不同程度的抗藥性。此外，氨酚喹、甲氯喹及其復(fù)方等毒副反應(yīng)也較為嚴(yán)重，直接影響到全世界每年1.03億瘧疾患者和2.64億瘧原蟲攜帶者的治療。
蒿甲醚（C18H28O5）和本芴醇（C30H32CI3NO）是近年來研制成功的兩種結(jié)構(gòu)和作用不同的新型抗瘧藥。此兩藥通常都用單藥治療。蒿甲醚的作用特點(diǎn)是殺瘧原蟲快速，但殺蟲不徹底，治療后病人血中殘留的原蟲復(fù)燃率高。本芴醇恰恰相反，殺蟲較徹底，治愈率高，卻奏效緩慢，但是兩者的共同點(diǎn)是對(duì)抗藥性惡性瘧疾療效顯著。
本發(fā)明的目的是提供一種抗瘧藥復(fù)方蒿甲醚，是基于運(yùn)用藥物間的增效作用和互補(bǔ)作用原理，通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，確定藥物間的作用類型，尋找復(fù)方的最佳組成，借以達(dá)到揚(yáng)長(zhǎng)避短的目的，既發(fā)揮蒿甲醚速效作用的優(yōu)勢(shì)，又充分利用本芴醇?xì)⑾x徹底，治愈率高的特點(diǎn)。迄至目前，國(guó)內(nèi)外尚無與此同類的抗瘧藥復(fù)方制品。
本發(fā)明的目的是通過以下的技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的。
一、通過動(dòng)物試驗(yàn)研究確定蒿甲醚和本芴醇的劑量系列配比關(guān)系以及達(dá)到最佳配比條件下的增效作用。以伯氏屬原蟲（Plasmodium berghei）感染小白鼠為試驗(yàn)?zāi)Ｐ?，采用正交性設(shè)計(jì)，用“4天抑制試驗(yàn)”法對(duì)兩藥物的不同劑量系列配比進(jìn)行抗瘧效價(jià)的平行對(duì)比試驗(yàn)，以直線回歸方程計(jì)算法求出ED50或ED90及其增效指數(shù)。
增效指數(shù)＝ (單藥ED5D或ED90)/(復(fù)方中相應(yīng)藥ED50或ED90)
按此公式求出本復(fù)方抗鼠瘧最佳配比為2∶0.75（ED90的增效指數(shù)＞6）。
在鼠瘧實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，進(jìn)行猴瘧原蟲（PlasmodiumKnowlesi）/恒河猴試驗(yàn)，結(jié)果表明復(fù)方抗瘧的最佳配比為1∶3～6。
二、本復(fù)方藥物間作用類型的評(píng)定是按照peters（1969）的相加線圖示法測(cè)定的，凡是復(fù)方ED90的坐標(biāo)點(diǎn)位于相加線附近者，判為藥物間有相加作用，坐標(biāo)點(diǎn)位于相加線下方，且遠(yuǎn)離該線者，判為藥物間有增效作用，若坐標(biāo)點(diǎn)位于相加線上方，且遠(yuǎn)離該線者，判為藥物間有拮抗作用，本復(fù)方呈藥效學(xué)增效作用。
三、對(duì)復(fù)方殺蟲速度的判定是用人工感染瘧疾的模型動(dòng)物血中原蟲密度增長(zhǎng)到高密度時(shí)，用大劑量（等效量）即20×ED90/ig給藥法，給藥后連續(xù)觀察動(dòng)物血中原蟲的下降速度，按原蟲下降90%的時(shí)間計(jì)算，復(fù)方為49.7小時(shí)，本芴醇單藥為64.3小時(shí)，因蒿甲醚未能使原蟲密度下降至90%即回升了?？梢姀?fù)方的殺蟲速度完全符合設(shè)計(jì)要求。
四、蒿甲醚和本芴醇組方最佳配比的臨床探索。根據(jù)動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果，參照蒿甲醚和本芴醇單藥臨床有效劑量推算西藥的最佳配比為1∶4～1∶6，因此按1∶4計(jì)量，每片含蒿甲醚25mg，本芴醇100mg，按1∶5計(jì)量，每片含蒿甲醚20mg，本芴醇100mg以及按1∶6計(jì)量每片含蒿甲醚20mg，本芴醇120mg，三種配比，選1∶5及1∶6設(shè)兩個(gè)組，進(jìn)行臨床平行對(duì)比試驗(yàn)，兩組均用3天4次療法，即首次口服4片，間隔8、24、48小時(shí)各服4片，成人總量16片。選擇惡性瘧疾患者40例，隨機(jī)分為兩組，試驗(yàn)結(jié)果顯示兩者藥后4小時(shí)，原蟲下降率分別為96.3%和94.2%;平均原蟲消失時(shí)間為34.8小時(shí)和36.0小時(shí)，平均退熱時(shí)間為23.2小時(shí)和22.4小時(shí)。但28天原蟲復(fù)燃率1∶5組為20%，1∶6組則無一復(fù)燃，全部治愈。證明在該試驗(yàn)中復(fù)方中的蒿甲醚和本芴醇對(duì)人瘧的最佳配比為1∶6。
五、復(fù)方延緩原蟲產(chǎn)生抗藥性作用的判定。通過小劑量遞增連續(xù)血傳法培育原蟲抗藥株，以此抗藥株對(duì)復(fù)方蒿甲醚和本芴醇單藥分別進(jìn)行抗藥性產(chǎn)生速度的平行對(duì)比試驗(yàn)，歷時(shí)560天，連續(xù)培育80代，結(jié)果證明兩藥伍用，具有延緩原蟲產(chǎn)生抗藥性和降低原蟲抗性程度的作用。例如培育20代的瘧原蟲對(duì)藥物耐受劑量計(jì)算，對(duì)本芴醇單藥的耐受劑量比其對(duì)原劑量的耐受力增加100倍，對(duì)蒿甲醚則增加20倍，但是對(duì)本復(fù)方僅增加2.9倍。按第30代抗性指數(shù)（Ⅰ90）計(jì)算，本芴醇＞410，復(fù)方＞19.3，說明此試驗(yàn)方法能較確切地評(píng)定本復(fù)方有延緩原蟲產(chǎn)生抗藥性的作用，在實(shí)際使用中不易產(chǎn)生抗藥性。
六、按藥理學(xué)方法測(cè)定復(fù)方在臨床上的副作用。以小鼠、大鼠和貓為試驗(yàn)?zāi)Ｐ?，?fù)方兩藥按1∶6配制，總用量為112mg/kg（相當(dāng)于人用一次劑量的10倍），按等容量灌胃，小鼠、大鼠均為10ml/kg，貓2ml/kg，觀察期間，對(duì)動(dòng)物的神經(jīng)系、心血管系及呼吸系等進(jìn)行檢查。但結(jié)果均無任何藥理活性變化。
七、按毒理學(xué)方法對(duì)復(fù)方進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)，其中蒿甲醚和本芴醇之比為1∶6配制。急性毒性試驗(yàn)用小白鼠半數(shù)致死量（LD50），灌胃給藥為4455mg/kg，腹腔注射為1554mg/kg。按化學(xué)毒力分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，該復(fù)方屬于低毒級(jí)。大白鼠和Bea-gle狗14天毒性試驗(yàn)，各設(shè)大、中、小三個(gè)劑量組，每天口服一次，連續(xù)14天，觀察并檢查動(dòng)物的飲食、體重、血液學(xué)、生化等指標(biāo)以及主要臟器和藥物靶器官的病理學(xué)檢查。結(jié)果顯示大白鼠的基本安全劑量為448MKD，相當(dāng)于臨床劑量的40倍;狗的安全劑量為556MKD，相當(dāng)于人用劑量的50倍。在大劑量組，靶器官的肝腎，雖有異常變化，但停藥后28天檢查均恢復(fù)正常。說明該復(fù)方毒性低，安全范圍大，無不可逆性毒性反應(yīng)。
八、復(fù)方和單藥對(duì)人惡性瘧療效比較。設(shè)兩個(gè)試驗(yàn)組，口服給藥，采用3天4次療法，各組惡性瘧患者20例，比較觀察復(fù)方及其相應(yīng)劑量的蒿甲醚和本芴醇單藥三者的療效。
給藥后24小時(shí)原蟲的下降率：復(fù)方為97%，蒿甲醚為95.1%，本芴醇為74.5%;平均原蟲消失時(shí)間：復(fù)方為35.6小時(shí)，蒿甲醚為38.7小時(shí)，本芴醇為68.4小時(shí);平均退熱時(shí)間復(fù)方為23.8小時(shí)，蒿甲醚為19.7小時(shí)，本芴醇為40小時(shí)，28天治愈率，分別為95%，45%和65%，該實(shí)驗(yàn)性治療方案能比較清晰地說明復(fù)方和單藥在療效上的差別，復(fù)方優(yōu)于單藥。
九、復(fù)方的臨床擴(kuò)大試驗(yàn)及氧喹療效對(duì)比試驗(yàn)，復(fù)方蒿甲醚口服給藥，3天4次療法，共收治惡性瘧疾400例。臨床觀察的主要指標(biāo)：（1）平均原蟲消失時(shí)間（試驗(yàn)結(jié)果為23.2～41.0小時(shí)）;（2）平均退熱時(shí)間（結(jié)果為20.4～25.7小時(shí)）;（3）給藥后28天治愈率（結(jié)果平均為95～100%），表明復(fù)方療效比蒿甲醚單藥（45%）提高1.3倍以上。
復(fù)方與氯喹療效對(duì)比試驗(yàn)。復(fù)方按3天4次療法給藥，氯喹采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)給藥，即首次4片，8、24和49小時(shí)各服2片，成人總量10片。復(fù)方組患者35例，氯喹組患者22例。觀察內(nèi)容：（1）平均原蟲消失時(shí)間（結(jié)果分別為37.8和87.3小時(shí)）;（2）平均退熱時(shí)間（結(jié)果分別為24.2和58.5小時(shí)）;（3）28天治愈率（結(jié)果分別為97.1%和40.9%）。證明復(fù)方對(duì)于抗氯喹瘧疾有顯著療效，明顯優(yōu)于氯喹1.4倍以上。
對(duì)患者血、尿及心電圖檢查均無異常發(fā)現(xiàn)。
根據(jù)本發(fā)明復(fù)方蒿甲醚提出的技術(shù)方案給出的實(shí)施例如下：實(shí)施例1：通過動(dòng)物試驗(yàn)研究，確定復(fù)方中蒿甲醚和本芴醇的劑量系列關(guān)系，以及兩藥混合后的增效作用。以伯氏瘧疾原蟲（Plasmodiumberghei）感染的小白鼠為試驗(yàn)?zāi)Ｐ?，采用正交性設(shè)計(jì)，“4天抑制試驗(yàn)”法對(duì)兩藥的不同劑量系列配比進(jìn)行抗瘧效價(jià)平行對(duì)比試驗(yàn)，以直線回歸方程計(jì)算法求出ED或ED及其增效指數(shù)。
增效指數(shù)＝ (單藥ED50或ED90)/(復(fù)方中相應(yīng)藥ED50或ED90)此公式求出復(fù)方抗鼠瘧的最佳配比。
在鼠瘧試驗(yàn)基礎(chǔ)上，以諾氏猴瘧原蟲（PlasmodiumKnowlesi）/恒河猴為模型進(jìn)行試驗(yàn)。每只猴靜脈接種5×10寄生瘧原蟲的紅細(xì)胞。當(dāng)動(dòng)物血液中原蟲寄生率達(dá)3～5%時(shí)，按設(shè)計(jì)方案開始給藥（灌胃）。首次給藥后每12小時(shí)涂片鏡檢一次，原蟲轉(zhuǎn)陰后改為每日一次，15天后隔日一次，連續(xù)觀測(cè)105天，根據(jù)藥效學(xué)標(biāo)準(zhǔn)判定試驗(yàn)結(jié)果。