70578-24-4 / 滇烏頭堿的應(yīng)用

背景及概述^[1][2]

黃草烏（Aconitum vilmorinianum Kom） 為毛茛科烏頭屬植物，主要分布于滇中及滇西部，是云南特色藥用植物，具有祛風(fēng)除濕、消腫止痛的功效，常用于冬季進(jìn)補(bǔ)或治療各種風(fēng)濕性疾病及疑難雜癥，但因安全范圍較窄，使用不當(dāng)或被非法使用導(dǎo)致中毒或死亡的案例日益增多。

滇烏頭堿（Yunaconitine） 為黃草烏中含量較高的一種雙酯二萜生物堿，又叫異烏頭堿、黃草烏堿乙，為二萜生物堿，分子式C₃₅H₄₉O₁₁，分子量659.77， 熔點(diǎn)142℃?143℃，可溶于甲醇、乙醇溶液，易溶于丙酮、氯仿、二氯甲烷和酸水，不溶于石油醚和水。滇烏頭堿具有抗炎、鎮(zhèn)痛和局部麻醉作用。但其毒性較大，常進(jìn)行分子結(jié)構(gòu)修飾，降低毒性，做為粗莖烏頭堿合成原料?，F(xiàn)有提取滇烏頭堿的方法，一般采用酸水滲漉或有機(jī)試劑提取，再萃取和柱層析。這樣有機(jī)試劑和酸水用量較大，因?yàn)橐话阒参镏械釣躅^堿含量較低，在1‰左右，同時(shí)現(xiàn)有烏頭類藥 材中都有多種毒性生物堿，容易造成人員中毒。采用超臨界CO₂萃取是比較理想方法，即可避免烏頭生物堿在提取中減少，有是一種無污染提取方法。如“亞東烏頭總生物堿的超臨界CO₂萃取及含量測定”，該方法取得了很好的收率和效果，工藝專屬性差。

藥代動力學(xué)^[2]

采用1.1 mg/kg 滇烏頭堿劑量灌胃給藥大鼠，建立滇烏頭堿的大鼠中毒模型，并于給藥后2h 處死大鼠，迅速提取心血及11 種臟器組織，采用UPLC-MS/MS 法檢測中毒大鼠生物檢材中滇烏頭堿的含量，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)：灌胃滇烏頭堿2 h 后，滇烏頭堿在大鼠體內(nèi)分布廣泛，以胃、小腸和肝臟組織中的含量較高，即消化道分布較高，提示滇烏頭堿的組織分布可能與外排轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白有關(guān)，滇烏頭堿可能影響P- 糖蛋白等轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)水平，從而影響滇烏頭堿的藥代動力學(xué)特征，組織分布、藥效和毒性，但具體機(jī)制有待于進(jìn)一步研究.

應(yīng)用^[3-5]

1）抗炎和鎮(zhèn)痛作用：滇烏頭堿對毛細(xì)血管通透性、不同致炎劑產(chǎn)生的足跖腫脹、白細(xì)胞游走和棉球肉芽組織增生均有明顯抑制作用。摘除雙側(cè)腎上腺后滇烏頭堿抗炎作用仍存在，但不延長生存時(shí)間。測痛方法證實(shí)滇烏頭堿有鎮(zhèn)痛作用。對酵母致熱大鼠有明顯解熱作用。

2）免疫調(diào)節(jié)作用。從云南產(chǎn)的烏頭屬植物根莖中分得的滇烏頭堿(YAc)毒性極高，生理活性亦強(qiáng)。YAc ip 50μg/kg能顯著延長小鼠耳后移植心肌的存活時(shí)間，與潑尼龍作用相近，并對實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎大鼠的遲發(fā)型超敏反應(yīng)有抑制傾向。YAc對抗體形成無明確的抑制作用，但能提高血清總補(bǔ)體的活性及網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能，有助于炎癥反應(yīng)中病原物質(zhì)的清除。

3）殺菌、抗菌作用。滇烏頭堿作為殺菌、抗菌劑，能有效抑制多種植物病原菌。最佳應(yīng)用在抗植物霜霉?。≒lasmoparaviticola），抗植物網(wǎng)斑病菌（Pyrenophorateres），抗植物小麥葉斑?。⊿eptoria tritici），抗植物禾頂囊殼（Gaeumannomycesgraminis）和抗植物黃色鐮刀菌（Fusarium culmorum）方面。滇烏頭堿在應(yīng)用時(shí)，首先采用DMSO溶解制備成母液。其應(yīng)用驗(yàn)證試驗(yàn)如下：取溫室中植物葡萄的葉片和葉段，放置在有水瓊脂培養(yǎng)的多孔板中（24孔板），葉片或葉段預(yù)先噴灑不同濃度的測試溶液。噴灑后接種病原菌霜霉病，培養(yǎng)9天后，根據(jù)葉片未感染病原菌面積計(jì)算抑制率。濃度為20PPM或60PPM的滇烏頭堿對霜霉病的抑制率為20%，濃度為200PPM的滇烏頭堿抑制率為50%。

制備^[1]

一種滇烏頭堿的純化方法，其特征在于包括以下步驟：以黃草烏藥材為原料，粉碎，加入醇浸潤1?2小時(shí)，加入萃取釜中，采用超臨界CO₂萃取，收集滇烏頭堿萃取物，用酸水溶解，過濾，加入陽離子交換樹脂吸附，堿性醇溶液洗脫，洗脫液減壓濃縮，加二氯甲烷萃取，萃取液濃縮，加氧化鋁干燥后裝柱，用石油醚?二氯甲烷混合溶液洗脫，薄層檢測，收集滇烏頭堿流分，洗脫液濃縮小體積放置結(jié)晶，結(jié)晶物干燥即得滇烏頭堿產(chǎn)品。

含量測定^[6]

同時(shí)測定制黃草烏中滇烏頭堿和8-去乙?；釣躅^堿的方法，包括對照品溶液制備、供試品溶液制備、檢測步驟，具體包括：

A、對照品溶液制備：分別精密稱取滇烏頭堿和8-去乙?；釣躅^堿，加0.1%的鹽酸甲醇配制成滇烏頭堿濃度16.11mg/mL、8-去乙?；釣躅^堿濃度為30.13mg/mL的混合溶液，得到對照品溶液；

B、供試品溶液制備：取制黃草烏粉末2.00g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨水2mL潤濕，加乙醚20mL，超聲處理提取，循環(huán)提取2~4次，合并提取液，蒸干，殘?jiān)?.1% 的鹽酸甲醇溶解并定容到10mL容量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，0.45μm微孔濾膜濾過，得到供試品溶液；

C、檢測：將對照品溶液和供試品溶液注入高效液相色譜儀進(jìn)行檢測。

主要參考資料

[1] CN201010603865.9一種滇烏頭堿的純化方法

[2] UPLC- MS/MS 法研究滇烏頭堿在大鼠體內(nèi)組織的分布

[3] 滇烏頭堿的抗炎和鎮(zhèn)痛作用

[4] 滇烏頭堿的免疫調(diào)節(jié)作用

[5] CN201210471272.0滇烏頭堿在農(nóng)藥方面的應(yīng)用

[6] CN201510101815.3一種同時(shí)測定制黃草烏中滇烏頭堿和8-去乙酰基滇烏頭堿的方法