69-89-6/黃嘌呤的檢測(cè)方法

背景及概述^[1]

黃嘌呤亦稱(chēng)“2，6-二羥基嘌呤”，為鱗片狀晶體(水)。微溶于醇，溶于水、無(wú)機(jī)酸、氨水及氫氧化鈉溶液，存在于動(dòng)物器官、酵母、番茄、咖啡豆及茶中。制法：可由鳥(niǎo)嘌呤硫酸溶液與亞硝酸鈉反應(yīng)而得。用途：作生化試劑。

檢測(cè)方法^[2-3]

王存等人以三聚氰胺為原料，采用熱聚合法合成了類(lèi)石墨烯狀二維片狀氮化碳(g-C3N4)納米材料；通過(guò)電沉積和高電位氧化的方法制得氧化聚咪唑(PImox)/g-C3N4修飾電極(PImox/g-C3N4/GCE)。采用掃描電子顯微鏡(SEM)和X射線粉末衍射儀(XRD)對(duì)g-C3N4納米材料進(jìn)行了表征；通過(guò)循環(huán)伏安法(CV)和差分脈沖伏安法(DPV)考察了尿酸(UA)、黃嘌呤(XA)和次黃嘌呤(HX)在該電極上的電化學(xué)行為。結(jié)果表明，UA，XA和HX的檢測(cè)線性范圍分別為2. 0～216. 0，5. 0～542. 0和5. 0～778. 0μmol/L；檢出限分別為0. 17，0. 30和0. 30μmol/L。將該修飾電極用于實(shí)際樣品(血清和尿液)中UA，XA和HX的同時(shí)測(cè)定，加標(biāo)回收率為98. 4%～105. 2%.

CN201811589035.8公開(kāi)了一種用于檢測(cè)次黃嘌呤和黃嘌呤的工作電極及其制備方法，以及采用該工作電極的酶生物傳感器體系；本發(fā)明的工作電極的制備方法簡(jiǎn)單，且該工作電極與參比電極、對(duì)比電極以及電化學(xué)工作站組合構(gòu)成的酶生物傳感器體系，可以用于檢測(cè)次黃嘌呤和黃嘌呤，并且有著較高的精準(zhǔn)性，不僅能夠檢測(cè)低濃度的底物，而且對(duì)于次黃嘌呤和黃嘌呤的濃度變化有著較高的靈敏性，且有較寬的檢測(cè)范圍，可以高效快速地獲得次黃嘌呤和黃嘌呤的濃度檢測(cè)結(jié)果，且具有很好的穩(wěn)定性，可以重復(fù)使用，多次使用下仍能夠保持對(duì)底物的靈敏檢測(cè)。

實(shí)施例：用于檢測(cè)次黃嘌呤和黃嘌呤的酶生物傳感器的體系

通常的酶生物傳感器體系包括電化學(xué)工作站和連接于電化學(xué)工作站的參比電極、對(duì)比電極和工作電極。

電化學(xué)工作站作為整個(gè)反應(yīng)體系信號(hào)變化的監(jiān)測(cè)器。本實(shí)施例所采用的電化學(xué)工作站購(gòu)買(mǎi)自上海辰華公司的CHI 760型號(hào)的產(chǎn)品。

在本實(shí)施例中，參比電極可以采用飽和甘汞電極(購(gòu)買(mǎi)自艾達(dá)恒盛公司的產(chǎn)品)，對(duì)比電極可以采用鉑絲電極(購(gòu)買(mǎi)自高仕睿聯(lián)公司的產(chǎn)品)。

另外，關(guān)于參比電極和對(duì)比電極，本領(lǐng)域技術(shù)人員也可以采用其他合適的電極，例如參比電極還可以采用Ag/AgCl；對(duì)比電極還可以采用石墨棒電極。

本實(shí)施例的酶生物傳感器的體系基于黃嘌呤氧化酶與次黃嘌呤及黃嘌呤發(fā)生氧化還原反應(yīng)的原理，將得失電子轉(zhuǎn)化為電信號(hào)傳輸?shù)诫娀瘜W(xué)工作站上，改變電化學(xué)工作站原有的電化學(xué)響應(yīng)信號(hào)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)次黃嘌呤及黃嘌呤濃度的檢測(cè)。

將參比電極、對(duì)比電極和工作電極連接于電化學(xué)工作站完成整個(gè)酶生物傳感器體系的構(gòu)建之后，將三個(gè)電極插入到0.05M、pH＝7.5的磷酸緩沖液溶液(以下簡(jiǎn)稱(chēng)PBS溶液)中，利用差分脈沖伏安法測(cè)試所得的相對(duì)響應(yīng)電流值制作次黃嘌呤濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線；制作過(guò)程簡(jiǎn)述如下：取次黃嘌呤的化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品(購(gòu)買(mǎi)自sigma公司)溶解于0.05M、pH＝7.5的PBS溶液中，震蕩1分鐘，分別配制不同濃度的次黃嘌呤標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.01μM、0.02μM、0.04μM、0.05μM、0.1μM、0.2μM，......)；記錄不同濃度的次黃嘌呤標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對(duì)響應(yīng)電流值，利用不同濃度的次黃嘌呤標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對(duì)響應(yīng)電流值，制作出次黃嘌呤濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。按照上述同樣的方法，記錄不同濃度的黃嘌呤標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對(duì)響應(yīng)電流值，制作黃嘌呤濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，參見(jiàn)圖2。

主要參考資料

[1] 化合物詞典

[2] 王存，孟麗，惠俊敏.聚咪唑/氮化碳新型納米復(fù)合材料修飾電極對(duì)尿酸、黃嘌呤和次黃嘌呤的同時(shí)檢測(cè)[J].高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報(bào)，2019，40(03):431-438.

[3] CN201811589035.8一種用于檢測(cè)次黃嘌呤和黃嘌呤的工作電極及其酶生物傳感器體系