65666-07-1 / 水飛薊素的制備方法

背景及概述^[1]

水飛薊素具有抗肝中毒、保護(hù)肝細(xì)胞膜、改善肝功能的藥理活性，臨床用于治療肝炎、 膽囊炎等。近年來研究發(fā)現(xiàn)，水飛薊素不僅具有保肝利膽作用，而且還具有明顯的抗脂質(zhì)過 氧化、抗輻射、清除自由基和抗胃潰瘍等作用，并且毒性小、無致畸和誘變作用，在降血脂、 防治動(dòng)脈粥樣硬化、預(yù)防腦缺血和抗血小板聚集等方面具有較好的效果，水飛薊素很有可能 成為防治心腦血管疾病的良好藥物。

制備^[1-2]

報(bào)道一、

a、選擇籽粒飽滿的水飛薊籽，清洗烘干，用機(jī)械軋油機(jī)采用三 級(jí)壓榨法進(jìn)行壓榨，100斤水飛薊籽可壓榨出15斤油，壓榨后的粕進(jìn) 行粗粉，備用；

b、投料，每罐投入1.5噸粗粉后的水飛薊粕，按1∶4的比例加入 丙酮，即1噸水飛薊粕加入4噸丙酮，用提取罐和濃縮罐進(jìn)行物料回流 提取10小時(shí)，物料溫度控制在25度，同時(shí)用冷凝器回收丙酮溶劑；

c、將溶劑過濾，濃縮2小時(shí)，溫度60度，蒸氣壓力1.5兆帕， 同時(shí)用冷凝器回收丙酮溶劑，得到糊狀浸膏；

d、將浸膏放到夾套鍋內(nèi)，加入1∶5的凈化純凈水，即1公斤浸 膏加入5公斤水，水溫加熱到80度，攪拌1小時(shí)，放掉水，這樣反 復(fù)重復(fù)6次；

e、將水飛薊浸膏放到真空干燥罐內(nèi)，進(jìn)行真空干燥，干燥溫度 120度，負(fù)壓0.8兆帕，連續(xù)進(jìn)行4?6小時(shí)，得到含水量在5％左右 的水飛薊素的干粉塊，將其粉碎成80?90目；

f、再將粉碎后的水飛薊素放入真空罐中進(jìn)行二次真空，干燥2 ?4小時(shí)，溫度80度，負(fù)壓0.8兆帕，即得水飛薊素干粉。

報(bào)道二、

1.復(fù)合微生物發(fā)酵劑凍干粉的制備過程

1.1原菌種活化

分別量取0.9％的生理鹽水10ml于2只試管內(nèi)，經(jīng)121℃滅菌20分鐘冷卻至28℃，將2 株菌安瓶內(nèi)的凍干菌粉末在無菌狀態(tài)下全部倒入0.9％的生理鹽水中，震蕩使其溶解，在28 ℃恒溫箱中靜止活化30分鐘，備用。

1.2發(fā)酵菌擴(kuò)大培養(yǎng)

1.2.1母發(fā)酵劑的制備

分別量取2株菌培養(yǎng)基各200ml于2只500ml三角瓶內(nèi)，121℃滅菌20分鐘冷卻至28℃， 按培養(yǎng)基體積的10％接種1.1步驟中已經(jīng)活化的菌種，在28℃、搖床轉(zhuǎn)速150轉(zhuǎn)/分鐘條件下 搖床培養(yǎng)24小時(shí)，作為母發(fā)酵劑。

1.2.2生產(chǎn)發(fā)酵劑的制備

首先配制質(zhì)量百分比濃度為10％的脫脂奶乳濁液，分裝于2只500mL三角瓶內(nèi)，每瓶 200mL，121℃滅菌20分鐘冷卻至28℃，分別按2％體積比例接種母發(fā)酵劑，28℃、搖床轉(zhuǎn)速 150轉(zhuǎn)/分鐘條件下?lián)u床培養(yǎng)48?52小時(shí)，檢測2株菌發(fā)酵液活菌數(shù)，各發(fā)酵液活菌數(shù)≥109 個(gè)/ml，視同為發(fā)酵成熟，如果活菌數(shù)＜109個(gè)/ml，繼續(xù)培養(yǎng)，直至達(dá)到109個(gè)/ml。

1.3粉末凍干菌種的制備

將成熟的生產(chǎn)發(fā)酵劑在無菌條件下導(dǎo)入玻璃安瓶中，液面高度低于1cm，加蓋瓶塞后放 入?30℃冰柜速凍，凍結(jié)后將玻璃安瓶用托盤乘裝，放入凍干機(jī)進(jìn)行冷凍干燥，制備粉末凍干 菌種。

1.4復(fù)合微生物發(fā)酵劑凍干粉的制備

按各粉末凍干菌種重量，取A菌粉末3份，B菌粉末2份，充分混勻后制成復(fù)合微生物 發(fā)酵劑凍干粉。

2.水飛薊素的制備

2.1水飛薊種子預(yù)處理

取水飛薊種子經(jīng)機(jī)械粉碎后，用螺旋式榨油機(jī)榨油，得去油種子餅粉，加水調(diào)整去油種 子餅粉水分含量為40％～45％，按濕去油種子餅粉重量的4.2％～4.8％添加蔗糖，充分混勻后， 121℃滅菌20分鐘冷卻至28℃，制成發(fā)酵培養(yǎng)基，備用。

2.2復(fù)合微生物發(fā)酵劑凍干粉活化

首先配制質(zhì)量百分比濃度為2％的葡萄糖溶液1千克，取5克復(fù)合微生物發(fā)酵劑凍干粉， 25℃～28℃條件下完全溶解于1千克葡萄糖溶液中，制成復(fù)合微生物菌懸液，靜止?fàn)顟B(tài)下活 化30分鐘。

2.3發(fā)酵

將經(jīng)過2.2步驟活化后的復(fù)合微生物菌懸液1千克，均勻接種在10千克經(jīng)過2.1步驟預(yù) 處理的發(fā)酵培養(yǎng)基上，然后將接種后的發(fā)酵培養(yǎng)基平攤在無菌盤中，培養(yǎng)基厚度12cm～15cm， 25℃～28℃條件下保溫發(fā)酵60小時(shí)。

2.4干燥

將經(jīng)過2.3步驟發(fā)酵處理的培養(yǎng)基75℃～80℃熱風(fēng)干燥，邊干燥邊攪拌，使發(fā)酵后的培 養(yǎng)基水分含量低于5％。

2.5提取

將2.4步驟處理的物料超微粉碎，過100目篩，按重量體積比為1g∶15mL的比例取過篩 后的粉末加入無水乙醇，在15℃～20℃、真空度為?0.1MPa條件下提取10h，膜分離后取上 清液減壓蒸餾回收乙醇，得黃色粉末狀物質(zhì)，按1g∶5mL的比例加甲醇溶解，經(jīng)過濾后取不溶物真空干燥，得水飛薊素。

參考文獻(xiàn)

[1] [中國發(fā)明] CN201010600010.0 一種低溶殘高含量水飛薊素的加工提取方法

[2] [中國發(fā)明] CN201210062208.7 一種水飛薊素的制備方法