手機(jī)掃碼訪問(wèn)本站
微信咨詢
甘草查而酮又名甘草查耳酮A，主要存在于豆科植物甘草、光果甘草、脹果甘草中?，F(xiàn)代研究表明，甘草查耳酮A具有抗炎、抗腫瘤、抗微生物、抗HIV、抗過(guò)敏等多種作用，同時(shí)其也作為合成其它活性衍生物的原料。
一種利于大生產(chǎn)操作、產(chǎn)品純度高的甘草查耳酮A的制備方法，技術(shù)方案：
取甘草，粉碎，加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為2-4％，萃取壓力10-30MPa，溫度50-70℃，CO2流量1-3ml/g生藥·min，萃取時(shí)間80-120min，得萃取物，加到聚酰胺層析柱上，以比例為2∶1的乙醇水混合溶劑作為洗脫劑洗脫，同時(shí)用同種類聚酰胺薄膜以上述洗脫劑來(lái)展開(kāi)作為配套檢測(cè)，收集對(duì)應(yīng)于聚酰氨薄膜上Rf＝5-5.5的流份，回收溶劑，加入丙酮結(jié)晶，洗滌、干燥即得。
1. 1 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡
細(xì)胞凋亡( apoptosis) 又稱程序性細(xì)胞死亡( programmed cell death)，是一種主動(dòng)性的細(xì)胞自殺行為。正常情況下，細(xì)胞的增殖與凋亡保持著一種平衡關(guān)系，一旦這種平衡關(guān)系遭到破壞，就可能導(dǎo)致腫瘤發(fā)生，腫瘤細(xì)胞能被化學(xué)藥物誘導(dǎo)變異和凋亡。甘草查耳酮 A 作用于人卵巢癌 OVCAR-3 及 SK-OV-3 細(xì)胞，可以下調(diào) Bid，Bcl-2，Bcl-xL和 survivin 蛋白水平，上調(diào)Bax 蛋白水平；能引起線粒體膜電位下降，促進(jìn)細(xì)胞色素 C釋放，活化 Caspases (-8，-9，-3) ；促進(jìn) PARP-1 裂解；上調(diào)抑癌基因 p53 表達(dá)水平，從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。類似的研究發(fā)現(xiàn)甘草查耳酮 A 可以通過(guò)下調(diào)抗凋亡蛋白 Bcl-2 表達(dá)，降低Bcl-2 /Bax 比率，促進(jìn) PARP 蛋白裂解，從而誘導(dǎo)人乳腺癌細(xì)胞系 MCF-7 細(xì)胞和人早幼粒白血病細(xì)胞系 HL-60 細(xì)胞凋亡；最近的研究也表明，甘草查耳酮 A 可以誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡，機(jī)制可能與裂解 PARP 蛋白，下調(diào) Caspase-3， Bcl-2 蛋白表達(dá)，上調(diào) Bax 蛋白表達(dá)有關(guān)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，甘草查耳酮 A 可顯著抑制皮下接種結(jié)直腸癌 CT-26 細(xì)胞 BALB /c小鼠的腫瘤生成，免疫組織化學(xué) TUNEL 染色發(fā)現(xiàn)， 隨甘草查耳酮 A 劑量增加，凋亡細(xì)胞比例逐漸增加。
1. 2 預(yù)防化學(xué)致癌， 抑制腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移
惡性腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移是其區(qū)別于正常細(xì)胞的特征之一，是其本身的生物學(xué)特征。腫瘤的轉(zhuǎn)移是其危及宿主生命及影響治療效果的主要原因。甘草查耳酮 A 對(duì)化學(xué)藥物誘導(dǎo)的腫瘤有明顯預(yù)防作用，氧化偶氮甲烷化學(xué)方法誘導(dǎo)的 C57BL /6 結(jié)腸癌小鼠經(jīng)口服給予 5，15，30 mg·kg-1甘草查耳酮 A，腫瘤發(fā)生率均明顯降低，并呈劑量依賴性。另外對(duì)甘草查耳酮 A 預(yù)防轉(zhuǎn)移的研究中發(fā)現(xiàn)，甘草查耳酮 A 可明顯提高脾臟內(nèi)注射 CT-26 細(xì)胞裸鼠成活率，同時(shí)抑制肝臟轉(zhuǎn)移。
1. 3誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化
惡性腫瘤細(xì)胞在形態(tài)、功能等方面都類似于未分化的胚胎細(xì)胞具有高分裂特征。誘導(dǎo)分化( induction of differentiation) 是指惡性腫瘤在誘導(dǎo)分化劑的存在下重新分化向正常成熟方向逆轉(zhuǎn)的現(xiàn)象。目前腫瘤誘導(dǎo)分化治療是腫瘤治療的一種新思路、新方法。甘草查耳酮 A體外研究顯示對(duì)多種腫瘤細(xì)胞具有抑制作用，甘草查耳酮 A作用于人早幼粒白血病 HL-60 細(xì)胞，可以誘導(dǎo)非特異性酯酶(NSE) 表達(dá)升高，對(duì)硝基藍(lán)四氮唑( NBT) 還原能力沒(méi)有影響，NSE 是巨噬細(xì)胞( 單核細(xì)胞) 形成的標(biāo)志，而NBT 還原能力是粒細(xì)胞形成的標(biāo)志，推測(cè)甘草查耳酮誘導(dǎo) HL-60 細(xì)胞向單核細(xì)胞分化而不是粒細(xì)胞。
1. 5 抑制血管新生
腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移依賴血管生成。研究發(fā)現(xiàn)甘草查耳酮 A 在體外、 體內(nèi)均能抑制血管生成。體外研究發(fā)現(xiàn)，甘草查耳酮 A 能顯著抑制人類臍帶血管內(nèi)皮細(xì)胞( HUVECs) 增殖( 20μmol·L-1)、遷移( 5～20μmol·L-1 ) 和管腔形成( 10～20μmol·L-1)，以及大鼠主動(dòng)脈環(huán)微脈管生長(zhǎng)( 10～20μmol·L-1) ，并呈劑量依賴性。體內(nèi)研究表明，甘草查耳酮 A 顯著地抑制 BALB/c 小鼠體內(nèi)接種結(jié)直腸癌 CT-26 細(xì)胞的生長(zhǎng)，隨濃度增加腫瘤組織 CD31 和 Ki-67陽(yáng)性細(xì)胞減少，但是凋亡率明顯增加。其抗血管新生機(jī)制可能與下調(diào)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因 子受體(VEGFR) -2 活化，阻斷VEGF / VEGFR-2 信號(hào)通路有關(guān)。
2. 1 抑制NO 合成
急、慢性炎癥的發(fā)生均和 NO 有關(guān)，誘導(dǎo)型 NO 合酶(iNOS) 是介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的重要的酶，病理狀態(tài)下 iNOS 催化產(chǎn)生過(guò)多的 NO?；ㄉ南┧岽x產(chǎn)物前列腺素(PG) 作為一種炎癥介質(zhì)， 在組織的炎癥反應(yīng)中也起著重要的作用， 環(huán)氧化酶(COX) 在 PG 合成途徑中起關(guān)鍵作用，其中炎癥發(fā)生時(shí) COX-2 會(huì)催化合成大量的 PG。甘草查耳酮 A 可降低 LPS 誘導(dǎo)的RAW264. 7 細(xì)胞誘生型一氧化氮合酶(iNOS) 和環(huán)加氧酶(COX)-2 表達(dá)，從而抑制細(xì)胞 NO和前列腺素(PG)E(2) 生成，同時(shí)還抑制炎性因子 IL-1β和IL-6 的產(chǎn)生。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明甘草查耳酮 A 通過(guò)抑制多種炎性細(xì)胞因子和 NO 的產(chǎn)生對(duì) LPS 誘導(dǎo)的裸鼠內(nèi)毒性休克起保護(hù)作用。
2. 2 抑制 NF-κB 激活
NF-κB可以高效誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞因子(TNF-α，IL-1，IL-6 等)、 趨化因子、 黏附因子(ICM-1，VCM-1)、炎性酶( iNOS，COX-2) 等基因表達(dá)，對(duì)炎癥反應(yīng)級(jí)聯(lián)放大，在多種炎癥性疾病的炎癥部位高度活化。甘草查耳酮 A可通過(guò)抑制NF-κB的激活發(fā)揮抗炎作用， 甘草查耳酮 A 可抑制 TNF-α 誘導(dǎo)的核定位( nuclear localization)、DNA 結(jié)合活性和NF-κB 的轉(zhuǎn)錄活性，其機(jī)制可能與甘草查耳酮 A 抑制IκK 的激活和 IκB 降解有關(guān)。甘草查耳酮 A 作用于脂多糖( LPS)誘導(dǎo)的RAW267. 4 細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，其NO 產(chǎn)生、TNF-α 表達(dá)和 MCP-1 表達(dá)水平均受到顯著抑制。C57BL/6小鼠注射 LPS 前給予甘草查耳酮 A，其血漿 TNF-α和 MCP-1水平也明顯降低。甘草查耳酮 A 顯 著 抑 制 LPS 誘導(dǎo)的TNF-α轉(zhuǎn)錄激活，然而對(duì) IκBα 降解和磷酸化作用以及 NF-κBP65 的核轉(zhuǎn)運(yùn)和 DNA 結(jié)合活性不產(chǎn)生影響，推測(cè)甘草查耳酮A 抗炎作用可能是通過(guò)抑制 NF-κB 的激活。另外，甘草查耳酮 A 可以降低腎炎小鼠尿蛋白水平，顯著抑制二甲苯所致的小鼠耳腫脹和角叉菜膠所致的大鼠足腫脹，對(duì)抗多種皮膚炎癥，包括兒童特異性皮炎以及紫外照射導(dǎo)致的皮膚炎癥等。
甘草查耳酮 A 對(duì)多種致病菌具有抑制作用。金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的腸毒素可能會(huì)導(dǎo)致人體多種疾病，包括金黃色葡萄球菌胃腸炎，食物中毒等，亞抑菌濃度的甘草查耳酮 A可顯著減少甲氧西林敏感金黃色葡糖球菌和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的腸毒素A( SEA) 和腸毒素 B( SEB) 分泌。甘草查耳酮 A 體外可以顯著下調(diào)金黃色葡萄球菌 hla 和 agr基因表達(dá)，抑制其α-毒素分泌，并抑制其溶血活性，抑制白色念珠菌生物被膜形成，阻止其向致病性更強(qiáng)的菌絲生長(zhǎng)狀態(tài)改變。另有研究指出甘草查耳酮 A 能夠抑制食品中芽孢桿菌生長(zhǎng)，對(duì)人類致病性分枝桿菌種和軍團(tuán)菌種等也具有較好的抑菌效果。
[1] CN201010535370.7 一種甘草查耳酮A的制備方法
[2]趙虹,蔣江濤,鄭秋生.甘草查耳酮A藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)中藥雜志,2013,38(22):3814-3818.