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牡丹根皮含有牡丹酚、芍藥甙、沒食子酸、揮發(fā)油0.15～0.4％植物淄醇、牡丹酚甙、沒食子酸葡萄糖、牡丹酚原甙、氧化芍藥甙等，因此牡丹不僅具有很高的觀賞藝術(shù)價值，且有很好的養(yǎng)生、美容、藥用價值。
牡丹酚經(jīng)現(xiàn)代醫(yī)學證明，具有鎮(zhèn)靜、催眠、抗菌、抗炎、抗氧化、降血壓、能夠抑細胞內(nèi)氧自由基的產(chǎn)生能使皮膚增白，并將皮膚中沉積的色素，還原退色，清淤化斑、清腫止痛、抗過敏、抗病毒，對色斑、肌肉痛、皮膚瘙癢、牛皮癬、帶狀皰疹；婦女痛經(jīng)、閉經(jīng)具有較好的治療和保健作用，促進面部肌膚血液循環(huán)、活化衰老表皮細胞，消除皺紋、去斑、潤膚、美容也有較好的功效。牡丹酚及多酚類物質(zhì)有一定量的R·OH基，能夠形成有抗氧化作用的氧自由基以消除超氧陰離子和羥自由基等自由基的活性。從而保護組織免受氧化作用的損傷，以提高其免疫功能、抗癌、抗衰老，因此已被稱作“第七大營養(yǎng)素”。因氧損傷導致許多慢性疾病，如：心血管病癥、衰老的主要原因，多酚的抗氧化功能可以對這些慢性疾病起到預(yù)防的作用，對能產(chǎn)生過氧化作用而導致結(jié)構(gòu)和功能損傷的超氧化陰離子和羥自由基有明顯的消除作用。作為一種很強的抗氧化劑可以抑制DL膽固醇氧化。DL膽固醇即壞膽固醇，是血液中的“雜質(zhì)”可以引起冠心病和心肌梗塞死等。其物理性可用紫外分光光度計測定，在274nm波長E(1％cm)為862紫外光區(qū)有強烈吸收，因此又有防曬的功效。
目前常用的從牡丹根皮中提取牡丹酚的方法有三種。一、醇提法以無水乙醇為溶劑，40℃溫度下回流提取，即可將牡丹酚提取出來。醇提法提取工藝簡單，有效成分提取多，似應(yīng)為牡丹皮提取的最佳方法，但問題在于牡丹酚熔點低、揮發(fā)性強，而醇提法提取過程中受熱溫度高、時間長,大大降低了牡丹酚的提取率。二、蒸餾－煎煮法蒸餾-煎煮法是指先蒸餾提取揮發(fā)性成分，藥渣再加水提取的方法，適用于含揮發(fā)性成分藥材的提取。牡丹酚隨蒸氣餾出后，在冷藏狀態(tài)下大量析出，濾過干燥即可用于成型，保存方便且轉(zhuǎn)移率較高，但其提取率遠低于醇提法。三、CO2超臨界流體萃取法：應(yīng)用超臨界萃取法是當前中草藥有效成分提取一個發(fā)展方向，具有提取溫度低、時間短等優(yōu)點，但是提取量少。目前還未見有關(guān)于利用乙醇以及CO2超臨界流體萃取制備牡丹酚的方法。
CN201610767084.0報道了一種牡丹酚的提取方法，具體步驟如下：
（1）取牡丹根皮粉碎，過40目篩，以3-6重量倍乙醇為夾帶劑，用CO2超臨界提取，具體參數(shù)為：萃取釜溫度65-72℃，萃取壓力11-14MPa，流速10-12L/h，提取時間5-6小時；第一分離釜：溫度52-56℃，分離壓力7MPa；第二分離釜：溫度40-43℃，分離壓力3-4MPa；制得牡丹根皮CO2超臨界萃取物A；
（2）將步驟（1）中的牡丹根皮CO2超臨界萃取物A通過大孔吸附樹脂吸附，用濃度為10-20％的乙醇預(yù)洗，再以流速10-12L/h、濃度為50-80％的乙醇洗脫，收集的洗脫液為藥液B；
（3）將藥液B在60-65℃范圍內(nèi)濃縮得稠膏C；
（4）取稠膏C以純化水提取5-6次，提取液冷卻至0-10℃，靜置24-30h，過濾，并在25-30℃范圍內(nèi)，濃縮成無醇稠膏D，即得牡丹酚。
作為本發(fā)明進一步的方案：所述步驟（1）中CO2超臨界提取，具體參數(shù)為：萃取釜溫度68℃，萃取壓力12MPa，流速11L/h，提取時間6小時；第一分離釜：溫度54℃，分離壓力7MPa；第二分離釜：溫度42℃，分離壓力3.5MPa；制得牡丹根皮CO2超臨界萃取物A。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提高了牡丹酚的提取率，縮短了提取時間，降低了提取溫度，本發(fā)明提取條件溫和，所用試劑均無毒，全部純天然萃取，無添加，無著色，提取的牡丹酚可用于食用等用途，口感清純，風味獨特，保存了天然活性成分，以利于人體吸收。
圖1是本發(fā)明的工藝流程圖。
牡丹酚與可接受的輔料，制成散劑，添加至飼料中，混勻，按日常飼料量喂食雞；或?qū)⒛档し又瞥赡档し铀苄苑蹌?，溶于水中，按日常飲水量喂食雞。通過動物感染實驗證實牡丹酚的抗球蟲指數(shù)(ACI)可達到180以上，具有較好的抗柔嫩艾美耳球蟲作用。
一種牡丹酚的層析分離純化方法，其包括以下步驟：
(a)細胞破碎：冷凍保存的牡丹丹皮破碎前一天取出，在室溫下解凍→稱取牡丹丹皮提取物懸液，記錄體積和質(zhì)量→加入等體積50毫摩爾PBS(pH6.8)→樣品裝在燒杯中，超聲細胞粉碎機進行細胞破碎，每個破碎周期間隙時間1s，超聲時間2s；總時間30min；在冰浴下進行。每隔5min用玻棒沿燒杯壁輕輕攪動，使破碎更完全，破碎后的樣品記為樣品1。
(b)鹽析：將步驟(a)取得的樣品1→4℃冷凍離心(8000rpm，30min)，去沉淀→加入適量固體(NH4)2SO4，使達28％飽和→4℃靜置→4℃冷凍離心(8000rpm，30min)，去沉淀→上清液中加入適量(NH4)2SO4，使達50％飽和→4℃靜置→4℃冷凍離心(8000rpm，30min)，去上清。所得樣品記為樣品2。固體(NH4)2SO4用量參考硫酸銨沉淀試劑表。(NH4)2SO4用前先碾勻，加(NH4)2SO4的過程要緩慢，并一邊輕輕攪拌，加完(NH4)2SO4后繼續(xù)攪拌幾分鐘。
(c)透析：收集步驟(b)鹽析所得的沉淀，裝入透析袋，排除氣泡，用透析夾封住袋口一將裝有樣品的透析袋置于合適容器中加入lO毫摩爾PBS緩沖液，開始透析，透析數(shù)小時。所得的樣品記為粗提液。
(d)選擇柱層析：牡丹提取物牡丹酚分離純化過程中，不同的的層析柱在洗脫條件等方面不盡相同。在柱型及洗脫條件的選擇上參考各種填料的性質(zhì)并進行改進。
(e)裝柱：選取合適規(guī)格層析柱→豎直固定柱子→調(diào)整流出管高度→往預(yù)加水/緩沖液的柱子中，小心裝入處理好的填料(HA、DEAE、DEAE-SepharoseFastFlow和SephadexG-X系列)→平衡。裝柱過程應(yīng)避免氣泡產(chǎn)生，用藍色葡聚糖2000過柱，檢驗裝柱效果。
(f)上樣走柱：上樣前，用攪拌器小幅度攪動，使柱頂端部分填料重懸→靜置→待液面與柱面相隔約1mm時，沿層析柱內(nèi)壁旋轉(zhuǎn)加入樣液，注意不要破壞柱面。
(g)洗脫干燥獲得成品：樣品完全進入柱體后，加入適量洗脫緩沖液，調(diào)整好各相關(guān)儀器(包括梯度洗脫器、攪拌器、恒流泵、核酸蛋白檢測儀及記錄儀和自動部分集器等)，開始洗脫，洗脫結(jié)束干燥后獲得牡丹酚成品。
[1][中國發(fā)明]CN201610767084.0一種牡丹酚的提取方法
[2]CN201310471618.1牡丹酚在制備抗柔嫩艾美耳球蟲藥物中的應(yīng)用
[3][中國發(fā)明]CN201410391884.8一種牡丹酚的層析分離純化方法