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黃吳茱萸為蕓香科植物吳茱萸Evodiarutaecarpa(Juss.)Benth，石虎Evodiarutae carpa(Juss.)Benth.var.officinalis(Dode)Huang或疏毛吳茱萸的干燥近成熟果實(shí)，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，距今已有上百年歷史，是一種傳統(tǒng)中藥，具有散寒止痛、降逆止嘔、助陽止瀉的功效，常用于厥陽頭痛、寒病腹痛、嘔吐吞酸、五更泄瀉、高血壓等癥。吳茱萸堿是其主要生物堿成分，是色胺吲哚類生物堿。其遇濃硫酸或濃鹽酸顯橙紅色，放置轉(zhuǎn)為紅棕色，加水稀釋轉(zhuǎn)為藍(lán)色，堿化后產(chǎn)生污藍(lán)色沉淀。從吳茱萸果實(shí)中提取分離而得，有升高血壓作用。
1）抑制腫瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡壞死
吳茱萸堿能誘導(dǎo)人肝癌HepG2、黑色素瘤A375-S2、宮頸癌HeLa等多種腫瘤細(xì)胞凋亡。用64、16、4、1、0.25μmol·L-1濃度的吳茱萸堿處理HepG2細(xì)胞72h的抑制率分別為74.0%、69.0%、60.5%、44.0%、16.4%。DAPI染色后吳茱萸堿組癌細(xì)胞均表現(xiàn)出較為典型的細(xì)胞凋亡特征。
2）抑制腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移
在研究中發(fā)現(xiàn)當(dāng)腫瘤細(xì)胞在含有吳茱萸堿的纖維素結(jié)合板上培養(yǎng)時(shí)，其擴(kuò)散受到明顯抑制。相對(duì)于順鉑會(huì)嚴(yán)重減少小鼠體重，吳茱萸堿并不對(duì)實(shí)驗(yàn)期間小鼠體重產(chǎn)生影響。因此，吳茱萸堿有望作為一種有效化合物用于治療腫瘤轉(zhuǎn)移。
吳茱萸堿（0.03μmol·L-1～1μmol·L-1）劑量依賴性增強(qiáng)豚鼠離體心房收縮力，加快收縮頻率，達(dá)到1μmol·L-1時(shí)能引起最大收縮。競(jìng)爭(zhēng)性辣椒素受體（VR1）拮抗劑Capsazepine(10μmol·L-1)、非競(jìng)爭(zhēng)性VR1拮抗劑釕紅（10μmol·L-1）和選擇性降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）受體拮抗劑CGRP8-37（10μmol·L-1）能取消這種作用，提示吳茱萸堿對(duì)豚鼠離體心房的興奮作用與激活VR1促進(jìn)CGRP釋放有關(guān)。吳茱萸堿能防止心臟過敏性損傷。
吳茱萸堿干預(yù)大鼠13周后，降低肥胖大鼠體重和Lee's指數(shù)，降低肥胖大鼠內(nèi)臟脂肪重量和內(nèi)臟脂肪重量指數(shù)，并降低肥胖大鼠血清總膽固醇和甘油三酯含量。吳茱萸堿能逆轉(zhuǎn)肥胖并發(fā)的血管肥厚；與正常大鼠相比，肥胖大鼠胸主動(dòng)脈組織和DRG中瞬態(tài)電壓感受器陽離子通道（TRPV1）表達(dá)降低，血清和腹主動(dòng)脈CGRP增加。吳茱萸堿和辣椒素能增加胸主動(dòng)脈組織和DRG中TRPV1的表達(dá)；吳茱萸堿能降低血清和腹主動(dòng)脈中CGRP含量，其作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)血清、血管組織和DRG中CGRP和TRPV1的表達(dá)有關(guān)。
研究吳茱萸堿是否能抑制低氧誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)吳茱萸堿能夠劑量依賴性的抑制環(huán)氧化物酶（COX-2）和一氧化氮合酶（iNOS）表達(dá)，減少前列腺素（E2）釋放。阻斷低氧誘發(fā)的AKt、70kDa核糖體蛋白S6激酶（p70S6K）和4E結(jié)合蛋白（4E-BP）磷酸化，調(diào)節(jié)低氧誘導(dǎo)性因子（HIF-1alpha）翻譯過程，對(duì)mRNA水平和蛋白降解率沒有影響。提示吳茱萸堿主要通過介導(dǎo)Akt和p70S6的去磷酸化而抑制低氧誘導(dǎo)的COX-2表達(dá)。吳茱萸堿顯著抑制醋酸引起的扭體次數(shù)，給予吳茱萸堿的小鼠離體回腸喪失了對(duì)感覺神經(jīng)刺激的反應(yīng)，保留了對(duì)迷走神經(jīng)刺激的反應(yīng)，吳茱萸堿通過感覺神經(jīng)脫敏而發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。
吳茱萸中分離吳茱萸堿和吳茱萸次堿的方法，具體制備方法包括以下步驟：
(1)取原料適量，加入1-50倍量的溶劑，所述溶劑為：甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯，或其混合溶劑，混合溶劑體積比控制為1：9～9：1，或甲醇、乙醇、丙酮水溶液，控制體積比為50％～95％，提取1-5次，每次1-4h，合并提取液回收溶劑得到浸膏；
(2)將步驟(1)中得到的浸膏用1-100倍量的低極性溶劑脫脂1-5次，然后再用1-100倍浸膏量的1-10％的鹽酸、硫酸、硝酸或磷酸水溶液浸泡洗滌1-48h，如此操作反復(fù)進(jìn)行1-6次；
(3)將步驟(2)中得到的洗滌后的固體加入到1-100倍量的1-20％的氨水、氫氧化鈣、氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液中，充分溶解1-48h，過濾，取出殘余固體，再加鹽酸、硫酸、硝酸或磷酸水溶液反應(yīng)1-48h，過濾或離心，得到固體；
(4)將步驟(3)中得到的固體用1-200倍量二氯甲烷、氯仿、丙酮或乙酸乙酯溶解，再過濾或離心，得到固液兩相，取出固液相分別用1-100倍量1-30％的氨水、氫氧化鈣、氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、磷酸一氫鈉、磷酸一氫鉀、磷酸二氫鈉或磷酸二氫鉀的水溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)1-48h，液相部分經(jīng)反應(yīng)后，析出固體，過濾或離心，洗滌，干燥，得到吳茱萸堿粗品，固相部分經(jīng)反應(yīng)后，過濾或離心，洗滌，干燥，得到吳茱萸次堿粗品；
(5)將上述吳茱萸堿粗品和吳茱萸次堿粗品，用二氯甲烷、氯仿、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、異丙醇或它們的混合溶劑進(jìn)行結(jié)晶和重結(jié)晶，最終得到高純度的吳茱萸堿和吳茱萸次堿晶體。
[1] 化學(xué)物質(zhì)辭典
[2] 吳茱萸堿的藥理學(xué)研究進(jìn)展
[3] CN201810317452.0從吳茱萸中分離吳茱萸堿和吳茱萸次堿的方法