479-91-4 / 蔓荊子黃素的應(yīng)用

背景及概述^[1][2]

蔓荊子為馬鞭草科牡荊屬單葉蔓荊VitextrifoliaL.var.simplicifoliaCharm.或蔓荊VitextrifoliaL.的干燥成熟果實，主要產(chǎn)于山東、廣西、云南、江西、浙江、福建、及廣東等地。蔓荊子為常用中藥，具有疏散風(fēng)熱、清利頭目、止痛的功效。臨床上用于治療風(fēng)熱、感冒頭痛、偏頭痛等癥。據(jù)報道，蔓荊子的主要活性成分是黃酮類化合物，其中蔓荊子黃素作為我國2010版藥典規(guī)定的蔓荊子藥材的質(zhì)控指標。

現(xiàn)在研究表明，蔓荊子黃素具有抗缺氧、抗不良刺激、抗疲勞、雙向調(diào)節(jié)機體、抑制血糖升高和影響學(xué)習(xí)記憶等多種作用。由此可見，目標成分的開發(fā)具有廣泛的商業(yè)價值。結(jié)構(gòu)式如下：

目前，蔓荊子中的蔓荊子黃素提取分離主要多采用柱色譜法，分離周期長，消耗溶劑多，操作復(fù)雜。高速逆流色譜(High-speedcountercurrentchromatography，HSCCC)作為一種新型分離純化技術(shù)，操作方便，快捷，分離度較高，克服了由固相載體帶來的樣品結(jié)合、失活、污染等缺點，已被廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物活性成分的分離制備和總草藥的分析鑒定。有文獻報道用高速逆流色譜分離純化蔓荊子黃素，但有上樣量少，分離時間長，純化效果不好等缺點，不能實現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)。。

檢測方法^[1]

蔓荊子黃素的常用檢測方法是高效液相色譜，但是在氧化石墨烯修飾的玻碳電極表面可得到一對氧化還原峰，其電催化反應(yīng)是受吸附控制的電極反應(yīng)。由于其催化效果明顯，利用循環(huán)伏安法即可建立檢測蔓荊子黃素含量的新方法，并用于實際樣品蔓荊子中蔓荊子黃素的含量檢測，結(jié)果令人滿意。蔓荊子黃素的電化學(xué)檢測新方法與其他分析方法相比，具有靈敏度高、檢出限低、反應(yīng)快速和操作簡單等特點，為蔓荊子藥物質(zhì)量的控制和檢測提供了新的平臺。

應(yīng)用^[3]

蔓荊子黃素具有疏散風(fēng)熱、清利頭目的功效，主治風(fēng)熱感冒頭痛、齒齦腫痛、目赤多淚、目暗不明、頭暈?zāi)垦５取＝陙碛嘘P(guān)蔓荊子的抗癌活性報道日益增多。蔓荊子黃素是蔓荊子的主要化學(xué)成分，王海燕等人報道了其具有抑制人癌細胞增殖的活性并進行了其抗癌機制的研究；SoMinLee等人報道了蔓荊子黃素保護血管的活性。

蔓荊子黃素不僅能通過誘導(dǎo)細胞凋亡發(fā)生抗腫瘤作用，還能通過周期抑制、抑制有絲分裂活動機制產(chǎn)生作用。本研究發(fā)現(xiàn)，在48h或者72h時間段，即使蔓荊子黃素的作用濃度為5μmol/L，其對細胞的抑制率仍然能達到53.8%和66.6%，對比同時間段，高濃度的蔓荊子黃素（10μmol/L）對細胞的凋亡率分別為16.8%和29.8%，這說明蔓荊子黃素對GH3細胞的增殖抑制作用，不僅是通過誘導(dǎo)細胞凋亡，也可能通過多種機制發(fā)揮復(fù)合作用。綜上所述，線粒體途徑誘導(dǎo)細胞凋亡是蔓荊子黃素抑制垂體瘤體外細胞生長的機制之一。

制備^[2]

取經(jīng)干燥的蔓荊子原料粉碎，稱2000g，每次加入10L80％乙醇溶液超聲提取60分鐘，提取3次，減壓濃縮提取液得到浸膏45g。按1質(zhì)量份浸膏加入100質(zhì)量份50％乙醇水溶液溶解，石油醚萃取，共萃取3次，合并萃取液回收石油醚得萃取物40g，萃取物上目數(shù)為100-200的聚酰胺柱，以體積分數(shù)80％的乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得粗提物，用于高速逆流分離。

在分液漏斗里配制正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水兩相溶劑體系，按體積比1:2:1:2混合，振搖后靜置分層，超聲脫氣30min。取上相注滿高速逆流色譜儀作為固定相，轉(zhuǎn)動主機，轉(zhuǎn)速800rpm，同時以5ml/min泵入下相做流動相，水浴溫度為20℃，建立動態(tài)平衡后，用流動相溶解粗提物，由進樣閥進樣，紫外檢測器在254nm波長下在線監(jiān)測，收集各目標成分，連續(xù)制備，相應(yīng)合并回收試劑，濃縮后甲醇結(jié)晶，從1000mg粗提物中分離得到高純度的蔓荊子黃素200mg。經(jīng)HPLC檢測，含量98.0％，經(jīng)UV、IR、MS、HNMR、CNMR等表征其物理性狀的數(shù)據(jù)與現(xiàn)有技術(shù)相一致。

主要參考資料

[1]王坤, 張桂菊, & 王宏. (2009). 不同地區(qū)炒蔓荊子中蔓荊子黃素的含量. 中藥材, 32(9), 1372-1373.

[2] 彭霞, & 臺海川. (2009). Hplc測定傣藥蔓荊葉中蔓荊子黃素的含量. 中國民族醫(yī)藥雜志, 15(10), 56-57.

[3] 宋永春, 張曦, 雷光焰, & 黨誠學(xué). (2010). 蔓荊子黃素對p53突變型人乳腺癌細胞增殖和凋亡的影響. 中華醫(yī)學(xué)雜志, 90(10), 703-707.