4233-96-9 / 沒食子兒茶素沒食子酸酯的制備

背景及概述^[1]

茶葉中的兒茶素主要為表型兒茶素，即表沒食子兒茶素沒食子酸酯EGCG、表沒食子兒茶素EGC、表兒茶素沒食子酸酯ECG、表兒茶素EC，它們約占兒茶素總量的60~80%。其中EGCG是綠茶茶多酚中含量最高的物質(zhì)，也是目前公認(rèn)的茶葉中最主要的抗氧化成分。然而現(xiàn)有研究已經(jīng)證實，表型兒茶素的異構(gòu)體如沒食子兒茶素沒食子酸酯GCG等在某些方面表現(xiàn)出較強(qiáng)的生理活性，如抗氧化和清除自由基活性等。兒茶素單體化合物主要是從茶葉或茶葉提取物中進(jìn)行提取，常用的分離純化方法有液液萃取、柱層析、中低壓柱色譜、高壓制備液相色譜和高速逆流色譜分離等。兒茶素的分離純化不乏其他方法，也常常采用兩種或多種方法聯(lián)合使用。文獻(xiàn)及專利中常見表沒食子兒茶素沒食子酸酯EGCG、表兒茶素沒食子酸酯ECG等的分離純化報道，但制備沒食子兒茶素沒食子酸酯GCG單體化合物的方法較少。

公開專利采用柱層析的方法純化制備單體兒茶素，如沒食子兒茶素沒食子酸酯GCG，但茶葉中沒食子兒茶素沒食子酸酯GCG含量較低，該方法提取效率不高。公開專利以兒茶素單體化合物為原料，經(jīng)高溫加壓熱轉(zhuǎn)化和凝膠介質(zhì)分離等過程制備非表型兒茶素。如以表沒食子兒茶素沒食子酸酯EGCG為原料，得到純度99.1%的沒食子兒茶素沒食子酸酯GCG單體化合物，但該方法所用原料成本高；同時，在轉(zhuǎn)化過程中加入鈉鹽或鉀鹽的堿金屬，引入了無機(jī)鹽等雜質(zhì)，且采用凝膠分離純化的方法，所制備的單體化合物純度較低。鑒于沒食子兒茶素沒食子酸酯GCG良好的營養(yǎng)保健和生理藥理作用，在茶葉及茶葉相關(guān)制品的質(zhì)量控制、生產(chǎn)工藝的優(yōu)化及其基礎(chǔ)功效學(xué)的研究過程中，需要高純度的沒食子兒茶素沒食子酸酯GCG單體化合物。

制備^[1]

高純度沒食子兒茶素沒食子酸酯GCG單體化合物的制備如下：稱取30g綠茶茶多酚（總兒茶素含量>98%，咖啡因含量<0.05%）樣品，加1000mL超純水?dāng)嚢璩暼芙猓糜诿荛]容器于130 ?C烘箱高溫轉(zhuǎn)化120min。取適量高溫轉(zhuǎn)化液，用0.22μm微孔濾膜過濾，進(jìn)行快速制備液相色譜分離?？焖僦苽湟合嗌V柱為C18型填料，填料質(zhì)量為120g，粒徑為20~40μm。分離條件為：流動相A：甲醇，流動相B：含0.1%（體積比）乙酸的水溶液；流速：50mL/min；梯度洗脫：15%A(0min)–20%A(5min)–25%A(10min)–30%A(25min)–35%A(30min)–50%A(40min)；上樣量：3mL；檢測波長：278nm。收集23.5~25.8min的沒食子兒茶素沒食子酸酯GCG餾分，采用高效液相色譜法檢測餾分純度，為90.12%。多次進(jìn)樣，收集合并沒食子兒茶素沒食子酸酯GCG餾分，于60 ?C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去甲醇并回收，濃縮液再經(jīng)過冷凍干燥，制得沒食子兒茶素沒食子酸酯GCG單體化合物粗品。

稱取適量沒食子兒茶素沒食子酸酯GCG單體化合物粗品，用25%（體積比）甲醇水溶液稀釋，配制濃度為40mg/mL的溶液，進(jìn)行高壓制備液相色譜分離。高壓制備液相色譜分離條件為：色譜柱：C18，10μm，21.5*250mm；流動相A：甲醇；流動相B：含0.1%（體積比）乙酸的水溶液；等度洗脫：25%A；流速：25mL/min；上樣量：2mL；檢測波長：278nm。沒收集并合并沒食子兒茶素沒食子酸酯GCG餾分，采用高效液相色譜法檢測餾分純度，為99.52%。沒食子兒茶素沒食子酸酯GCG餾分于60 ?C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去甲醇并回收，濃縮液再經(jīng)過冷凍干燥和真空干燥，制得沒食子兒茶素沒食子酸酯GCG高純單體化合物。對上述制備的沒食子兒茶素沒食子酸酯GCG高純單體化合物，再次進(jìn)行高效液相色譜純度檢測，為99.51%。

主要參考資料

[1] CN201610129512.7一種制備高純度沒食子兒茶素沒食子酸酯GCG的方法