40077-57-4 / 醋酸阿肽地爾的制備

概述^[1]

醋酸阿肽地爾又稱血管活性腸肽，是一種含有28個(gè)氨基酸的多肽。其氨基酸機(jī)構(gòu)如下所示：

His?Ser?Asp?Ala?Val?Phe?Thr?Asp?Asn?Tyr?Thr?Arg?Leu?Arg?Lys?Gln?Met?Ala?Val?Lys?LysTyr?Leu?Asn?Ser?Ile?Leu?Asn。

醋酸阿肽地爾是從小腸粘膜提取的一種直鏈肽，其氨基酸排列為一部分胰高血糖素(glucagon)和催胰液素(secretin)，具有可使血管舒張降低血壓的作用，從肝動(dòng)脈開始，對(duì)內(nèi)臟血管具有較強(qiáng)的作用能力。對(duì)腸液的分泌具有很強(qiáng)的促進(jìn)作用，對(duì)胃液的分泌可起抑制作用；對(duì)消化道平滑肌的收縮產(chǎn)生抑制作用。

應(yīng)用^[3]

醋酸阿肽地爾為MondobiotechAG和BiogenIdec公司開發(fā)出來，是由28個(gè)氨基酸組成的線性肽。主要用于急性呼吸窘迫綜合癥和特發(fā)性肺纖維化治療，其效果較好且副作用小，是一種很有市場(chǎng)前景的多肽藥物。

制備^[2]

目前醋酸阿肽地爾常規(guī)合成方法為逐個(gè)偶聯(lián)方法，其他合成方法還未有報(bào)道，有關(guān)其劑型和應(yīng)用的報(bào)道比較常見，如專利CN101247794為醋酸阿肽地爾液體藥物制劑及其用于制備治療肺動(dòng)脈高壓、急性呼吸窘迫綜合癥等疾病的藥物的用途專利；US7468353為在治療非典型肺部感染中的用途專利。然而，用逐個(gè)偶聯(lián)法在制備醋酸阿肽地爾的過程中，合成周期長(zhǎng)，雜質(zhì)較多，收率和純度無法達(dá)到較高水平，特別是合成His1和Ser2時(shí)，逐個(gè)偶聯(lián)法極易產(chǎn)生消旋雜質(zhì)，并且雜質(zhì)通過純化方法難以去除，導(dǎo)致醋酸阿肽地爾產(chǎn)品純度的降低而雜質(zhì)D?His1?醋酸阿肽地爾以及D?Ser2?醋酸阿肽地爾含量過高，影響產(chǎn)品品質(zhì)。

具體實(shí)施方法：

方法一：

步驟1、固相合成在SEQIDNO:1所示氨基酸序列Lys側(cè)鏈上、Tyr側(cè)鏈上、Asn側(cè)鏈上、Ser側(cè)鏈上偶聯(lián)有保護(hù)基且在C端偶聯(lián)有樹脂的多肽片段樹脂Ⅰ；

固相合成在SEQIDNO:2所示氨基酸序列N端、Tyr側(cè)鏈上、Thr側(cè)鏈上、Arg側(cè)鏈上、Lys側(cè)鏈上、Gln側(cè)鏈上偶聯(lián)有保護(hù)基且在C端偶聯(lián)有樹脂的多肽片段樹脂Ⅱ；

固相合成在SEQIDNO:3所示氨基酸序列N端、Asp側(cè)鏈上、Thr側(cè)鏈上、Asn側(cè)鏈上偶聯(lián)有保護(hù)基且在C端偶聯(lián)有樹脂的多肽片段樹脂Ⅲ，然后脫除多肽片段樹脂Ⅲ的N端保護(hù)基與Boc?His(3?Bum)?Ser(Psi(Me,Me)pro)?OH偶聯(lián)得到多肽片段樹脂Ⅳ；

步驟2、加入裂解液去除多肽片段樹脂Ⅱ和多肽片段樹脂Ⅳ的樹脂，對(duì)應(yīng)得到多肽片段Ⅱ和多肽片段Ⅳ，然后將多肽片段Ⅱ的C段與多肽片段樹脂Ⅰ的N端偶聯(lián)，接著將多肽片段Ⅳ的C段與脫除N端保護(hù)基的多肽片段Ⅱ的N段偶聯(lián)，得到醋酸阿肽地爾樹脂；

步驟3、加入裂解液去除醋酸阿肽地爾樹脂中的樹脂和所有保護(hù)基，獲得醋酸阿肽地爾粗品，經(jīng)RP?HPLC純化后獲得醋酸阿肽地爾純品。

其中，作為優(yōu)選，步驟2所述偶聯(lián)采用PyBOP/HOBt/DIPEA三試劑偶聯(lián)體系、HOAt/DIPCDI雙試劑偶聯(lián)體系、HOBt/DIPCDI雙試劑偶聯(lián)體系、HATU/HOAt/DIPEA三試劑偶聯(lián)體系、TBTU/HOBt/DIPEA三試劑偶聯(lián)體系、或HBTU/HOBt/DIPEA三試劑偶聯(lián)體系偶聯(lián)。步驟2所采用的偶聯(lián)體系各偶聯(lián)試劑之間的摩爾比優(yōu)選為：

PyBOP:HOBt:DIPEA為1:1.2:2，HATU:HOAt:DIPEA為1:1.2:2，HBTU:HOBt:DIPEA為1:1.2:2，TBTU:HOBt:DIPEA為1:1.2:2，HOAt:DIPCDI為1.2:1.2，HOBt:DIPCDI為1.2:1.2；

方法二：

步驟1，通過液相法合成二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH；

步驟2，采用固相合成法，以RinkAmideMBHA氨基樹脂為起始樹脂，按照醋酸阿肽地爾主鏈肽序依次偶聯(lián)具有N端Fmoc保護(hù)且側(cè)鏈保護(hù)的氨基酸，其中23、24位和27、28位氨基酸偶聯(lián)采用二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH偶聯(lián)，而第1位氨基酸采用Boc-His(Trt)-OH；

步驟3，肽樹脂裂解，純化，凍干后得到醋酸阿肽地爾。

其中，步驟1所述的二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH的合成方法包括如下步驟：1）Fmoc-Leu-OH、HOSu和DCC偶聯(lián)得到Fmoc-Leu-OSu，然后Fmoc-Leu-OSu和H-Asn-OH反應(yīng)得到二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH。

其中，步驟2所述的固相合成方法，所述方法包括以下步驟：1）采用0.10~0.90mmol/g的氨基樹脂為起始樹脂；2）采用由體積比為1:4的哌啶和DMF組成的去保護(hù)液脫除氨基樹脂上的Fmoc保護(hù)基；3）在偶聯(lián)劑系統(tǒng)的存在下，氨基樹脂和Fmoc-Leu-Asn-OH偶聯(lián)得到Fmoc-Leu-Asn-氨基樹脂；4）重復(fù)步驟2）、3），按照醋酸阿肽地爾主鏈肽序依次偶聯(lián)具有N端Fmoc保護(hù)且側(cè)鏈保護(hù)的氨基酸，其中23、24位氨基酸偶聯(lián)采用二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH偶聯(lián)，而第1位氨基酸采用Boc-His(Trt)-OH。所述偶聯(lián)劑系統(tǒng)包括縮合劑和反應(yīng)溶劑，所述縮合劑選自DIC/HOBt、PyBOP/HOBt/DIEA或HATU/HOBt/DIEA；所述反應(yīng)溶劑選自DMF、DCM、NMP、DMSO或他們之間的組合。

主要參考資料

[1]楊東暉, 路楊, & 周亮. . 一種制備阿肽地爾的方法.

[2] 張小靈, 閻朗明, 尹剛, 楊建國(guó), & 徐東. (2004). 肝復(fù)肽聯(lián)合前列地爾治療慢性重型肝炎20例療效初步觀察. 寄生蟲病與感染性疾病, 2(1), 20-20.

[3] 王超. (2011). ATP敏感鉀通道的激活對(duì)傷害性疼痛行為以及對(duì)DRG的超敏反應(yīng)的拮抗作用. (Doctoral dissertation, 河北醫(yī)科大學(xué)).