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萘啶酮酸又稱萘啶狄克酸或溫吐曼龍，白色至淡黃色結(jié)晶性粉末，無臭，無味。熔點(diǎn)229～ 230℃，難溶于氯仿、醇、水、乙醚，系抗菌劑，用于治療革蘭氏陰性細(xì)菌所致的尿道感染，是喹諾酮類第一代抗菌藥代表。由2-氨基-5-甲基吡啶與原甲酸乙酯及丙二酸二乙酯縮合成N-(2-甲基-5-氨基吡啶) 甲叉丙二酸二乙酯，經(jīng)環(huán)合、水解得到7-甲基-1，8-萘啶-4-羥基- 3-羧酸，再用溴乙烷進(jìn)行N-烷基化并異構(gòu)制取。其作用機(jī)制是抑制細(xì)菌的DNA促旋酶、干擾DNA的合成，從而抑制生長期細(xì)菌的繁殖。抗菌譜窄，對(duì)多數(shù)G-桿菌有效，但對(duì)銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)無效；對(duì)G+細(xì)菌和厭氧菌均無效。口服用?？芍委熡纱竽c埃希氏菌(Escherichia coli)和變形桿菌(Proteus spp)等引起的尿路感染。細(xì)菌易對(duì)本品產(chǎn)生耐藥性。
cn201510316647報(bào)道了將萘啶酮酸用于制備一種沙門氏菌、單增李斯特菌和副溶血弧菌復(fù)合增菌的選擇性培養(yǎng)基。本發(fā)明的培養(yǎng)基能夠同時(shí)對(duì)目標(biāo)菌沙門氏菌、副溶血弧菌和單增李斯特菌進(jìn)行復(fù)合增菌并抑制其他非目標(biāo)菌，且對(duì)處于亞致死狀態(tài)的目標(biāo)菌抑制作用小，使亞致死狀態(tài)的目標(biāo)菌也能進(jìn)行增菌，增菌效果好；本發(fā)明提供的培養(yǎng)基制備方法操作簡單，效率高。
本發(fā)明的具體技術(shù)方案為：一種沙門氏菌、單增李斯特菌和副溶血弧菌復(fù)合增菌的選擇性培養(yǎng)基，按重量份數(shù)計(jì)包括如下組分：胰蛋白胨15-20份，蛋白胨2-4份，氯化鈉8-12份，磷酸二氫鈉2-3份，葡萄糖2-3份，甘露醇2-3份，七葉苷0.01-0.03份，檸檬酸鈉0.5-1.5份，脫脂奶粉4-6份，滅菌蒸餾水1000 份，1mol/l的氫氧化鉀溶液0.1-1份，1mol/l的鹽酸溶液0.1-1份，亞碲酸鉀溶液0.8-1.2份，吖啶黃溶液0.8-1.2份，萘啶酮酸溶液0.8-1.2份。所述亞碲酸鉀溶液由0.00005份亞碲酸鉀和10份滅菌蒸餾水組成；所述吖啶黃溶液由0.1份吖啶黃和10份滅菌蒸餾水組成；所述萘啶酮酸溶液由0.01份萘啶酮酸和10份濃 度為0.05mol/l的氫氧化鈉溶液組成。
在本發(fā)明的培養(yǎng)基中，以沙門氏菌、單增李斯特菌和副溶血弧菌為目標(biāo)菌，胰蛋白 胨、蛋白胨、氯化鈉和磷酸二氫鈉作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基為菌類提供營養(yǎng)源。葡萄糖、甘露醇作為生長促進(jìn)劑，能夠促進(jìn)菌類生長。脫脂奶粉作為復(fù)蘇促進(jìn)劑，能夠促進(jìn)處于亞致死狀態(tài)的目標(biāo)菌復(fù)蘇。檸檬酸鈉作為目標(biāo)菌可以利用的碳源，而其對(duì)于其他眾多菌類則無法被利用。七葉苷、亞碲酸鉀溶液、吖啶黃溶液和萘啶酮酸溶液是作為抑制劑，它們具有選擇性的抑制作用，對(duì)目標(biāo)菌的抑制作用較小，對(duì)其他眾多菌類的抑制效果較強(qiáng)。
本發(fā)明的培養(yǎng)基能夠同時(shí)對(duì)目標(biāo)菌沙門氏菌、副溶血弧菌和單增李斯特菌進(jìn)行復(fù)合增菌并抑制其他非目標(biāo)菌，且對(duì)處于亞致死狀態(tài)的目標(biāo)菌抑制作用小，使亞致死狀態(tài)的目標(biāo)菌也能進(jìn)行增菌，增菌效果好。本發(fā)明提供的培養(yǎng)基制備方法操作簡單，效率高，效果好。
cn201210058230.4提供了一種選擇性培養(yǎng)幽門螺旋桿菌的混合抑菌劑，以解決幽門螺桿菌培養(yǎng)生長條件要求苛刻，培養(yǎng)過程繁瑣、培養(yǎng)技術(shù)要求高，雜菌生長多的問題。本發(fā)明的另一目的是提供所述選擇性培養(yǎng)幽門螺旋桿菌的混合抑菌劑制備方法。實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：一種選擇性培養(yǎng)幽門螺旋桿菌的混合抑菌劑，其配方組成為：萬古霉素3～50 mg/l，萘啶酮酸5～10.0 mg/l，tmp3～5.0 mg/l，兩性霉素1～2.0 mg/1, nisin 8～10 mg/1。進(jìn)一步，所述選擇性培養(yǎng)幽門螺旋桿菌的混合抑菌劑的制備方法，主要包括下列步驟：
1）培養(yǎng)基的配制：
培養(yǎng)基配方：930 ml/l腦心浸液培養(yǎng)基，80 ml/l胎牛血清，1.0 g/lβ?cd，0.04 g/l ttc（四氮唑紅），ph 7.2?7.4；
1.1）按上述配方配制好培養(yǎng)基，裝入500 ml錐形瓶(300ml/瓶)，用封口膜將瓶口封緊，121℃ 高壓消毒15～30 min，待高壓鍋壓力降至0后，取出培養(yǎng)瓶，自然冷卻；
1.2）解凍綿羊血，56℃、30 min滅活補(bǔ)體(為防止多次開啟，可用小瓶分裝成10 ml小包裝于?2o℃保存?zhèn)溆?；
1.3）將步驟1.1）冷卻至40℃左右的上述培養(yǎng)基倒入無菌培養(yǎng)皿中，加入預(yù)先配制好的選擇性抗生素 (萬古霉素3?50 mg/l，萘啶酮酸5?10.0 mg/l，tmp3?5.0 mg/l，兩性霉素1?2.0 mg/1, nisin 8?10 mg/1)和步驟1.2）解凍的綿羊血(8%～10%)（ml/100ml,體積分?jǐn)?shù)）；再將該無菌培養(yǎng)皿放置15～30 min，自然凝固后盡快封閉培養(yǎng)基，為防止污染，瓶口開啟時(shí)間盡可能短。；
2）細(xì)菌接種與培養(yǎng)：
2.1）用吸管吸取0.1ml hp菌懸液，滴于步驟1.3）的固體培養(yǎng)基上，用l形棒涂開；
2.2）將步驟2.1）已接種好的培養(yǎng)皿放入?yún)捬跖囵B(yǎng)罐，蓋緊頂口，使用氣體發(fā)生袋；或采用抽氣換氣法，將培養(yǎng)罐內(nèi)氣壓抽至0或接近0，立即沖入混合氣體(5% o2，10% co2 ，85% n2 )，沖混合氣體的速度不能太快，以免雜菌充入污染，側(cè)口處塞一滅菌棉花團(tuán)，可防止污染；
2.3）將步驟2.2）培養(yǎng)罐置于37℃ 恒溫箱中培養(yǎng)，72 h后觀察菌落生長情況；hp生長的最佳濕度>9o%，為保證培養(yǎng)基的濕度，可在培養(yǎng)罐中放入裝有適量水的小燒杯，以維持培養(yǎng)基濕度；
3）細(xì)菌的保存：
選取對(duì)數(shù)生長期(一般為培養(yǎng)48h)的hp進(jìn)行保存；用接種環(huán)刮取培養(yǎng)菌于保存液中，調(diào)整細(xì)菌濃度(1×108～1×109cfu/ml)，保存液基質(zhì)為腦心浸液和100%甘油；將菌液分裝至0.5 ml ep管中，每管0.2～0.3 ml，置?7o℃或液氮中保存。
相比現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有如下有益效果：
i、本發(fā)明制備以兩性霉素b、萘啶酮酸、萬古霉素、tmp及nisin的混合抑菌劑，在培養(yǎng)基中加入混合抑菌劑不但能減少枯草桿菌、革蘭陽性球菌、霉菌等雜菌的污染，同時(shí)又能提供hp生長所需的胸腺嘧啶脫氧核苷抑制雜菌生長。
ii、本發(fā)明抑菌劑與現(xiàn)有文獻(xiàn)資料的抑菌劑相比，加入nisin后明顯提高了抑菌效果：a、兩性霉素1?2.0 mg/1、萬古霉素3?50 mg/l、萘啶酮酸5?10 mg/l 、tmp3?5.0 mg/l、多粘菌素b 5?10 mg/l,有雜菌生長，抑制雜菌效果不明顯；b、兩性霉素1?2.0 mg/1、萬古霉素3?50 mg/l、萘啶酮酸5?10.0 mg/l、tmp3?5.0 mg/l、nisin 5?10 mg/1,無雜菌生長，抑制效果明顯。
[1] 微生物學(xué)詞典
[2] cn201510316647.x一種沙門氏菌、單增李斯特菌和副溶血弧菌復(fù)合增菌的選擇性培養(yǎng)基及其制備方法
[3] cn201210058230.4選擇性培養(yǎng)幽門螺旋桿菌的混合抑菌劑及其制備方法