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雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)為衛(wèi)矛科雷公藤屬植物，臨床上已廣 泛用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腎病綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等多種自身免疫疾病，其見效快、療效確切，幾乎沒有可以完全替代的類似中藥。雷公藤內(nèi)酯酮(Triptonide)，又叫雷公藤羰內(nèi)酯、雷公藤酮，是從雷公藤中分離得到的一個二萜類化合物，是雷公藤的有效成份之一，它與雷公藤內(nèi)酯醇結(jié)構(gòu)相似，活性也相當(dāng)，其結(jié)構(gòu)式如下。雷公藤內(nèi)酯酮具有抗雄性生育作用和對免疫功能具有一定的影響。
一、利用離子液體高效提取雷公藤內(nèi)酯酮的方法，其特征在于包括以下步驟：
1）超聲強(qiáng)化提?。汉坠賰?nèi)酯酮的植物原料經(jīng)干燥粉碎后過40~80目篩，按固液比1： 5~50加入體積比為10：0.1~0.8：2~10的乙醇、水和咪唑類離子液體Ⅰ混合液，于超聲功率密度10~200W/cm2及超聲頻率10~100kHz下，20~65 ℃條件下超聲提取5~60 min，固液分離后得含雷公藤內(nèi)酯酮的提取液；
2）有機(jī)溶劑萃?。簩⒅咀弭人狨ズ鸵欢康乃尤氲剿霾襟E1）得到的提取液中，按提取液、水與脂肪族羧酸酯的體積比1~5：1~3：1，萃取1~5次。分離有機(jī)相得雷公藤內(nèi)酯酮萃取相，然后將有機(jī)相在40~60℃下減壓濃縮至近干，得到含有雷公藤內(nèi)酯酮的浸膏。萃取余液可循環(huán)使用，該萃取余液的主要成份為上述咪唑類離子液體Ⅰ；
3）柱層析凈化：將得到的含有雷公藤內(nèi)酯酮的浸膏與硅膠（200~300目）按重量比1：10~100進(jìn)行充分混合后裝入一支底部具有篩板的玻璃層析柱中，先用適量乙醚淋洗，再用體積比為4：1的乙醚與乙酸乙酯混合溶劑洗脫，控制洗脫液流速不大于10 mL/min，收集洗脫液， 然后將其在40~60℃下減壓濃縮至近干，得到雷公藤內(nèi)酯酮粗品；
4）HSCCC分離純化：選擇HSCCC溶劑體系，按體積/重量比0.2~2：1 (mL/mg）將HSCCC溶劑體系和上述雷公藤內(nèi)酯酮的粗品加入到分液漏斗中，震蕩、靜置分層、平衡后，將上、下相分開，以溶劑體系的上相為固定相，溶劑體系的下相為流動相，調(diào)整轉(zhuǎn)速，以一定流速泵入流動相，根據(jù)檢測器顯示的譜圖分步收集目標(biāo)物，獲得含雷公藤內(nèi)酯酮的溶液；
5）真空冷凍干燥：在適當(dāng)溫度、壓力下，將上述雷公藤內(nèi)酯酮溶液進(jìn)行真空冷凍干燥，并回收有機(jī)萃取劑，得到純度大于95%的雷公藤內(nèi)酯酮。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：采用了按一定比例混合而成的乙醇、水和咪唑類離子液體Ⅰ混合溶液作為提取液，同時結(jié)合超聲輔助技術(shù)在含有雷公藤內(nèi)酯酮的植物原料中提取雷公藤內(nèi)酯酮，該提取液與純有機(jī)溶劑提取液相比，大大節(jié)約了有機(jī)溶劑的使用量，綠色、環(huán)保、經(jīng)濟(jì)，降低了揮發(fā)性有機(jī)溶劑對環(huán)境及實(shí)驗人員帶來的污染和危害，同時由于添加了離子液體，大大改善了提取效果，提高了提取效率。進(jìn)一步，本發(fā)明在HSCCC流動相中添加了功能化離子液體，明顯縮短了HSCCC的分離時間，顯著提高了分離效率，得到的雷公藤內(nèi)酯酮的純度大于95%，而且在環(huán)境友好性和人體安全性方面更具優(yōu)勢。圖1為HSCCC的雷公藤內(nèi)酯酮的紫外色譜圖。
二、合成方法如下：取雷公藤內(nèi)酯醇若干，以有機(jī)溶劑溶解后，在輔助試劑的存在下，加入一定量的氧化劑，在反應(yīng)后，經(jīng)有機(jī)溶劑稀釋，以NaOH，HCl或/和飽和NaHCO3及水洗滌后，以無水Na2SO4干燥后濃縮，再用有機(jī)溶劑重結(jié)晶或硅膠柱層析分離，得雷公藤內(nèi)酯酮。上述合成反應(yīng)式為：
取29.4mg重鉻酸鉀，加1ml水溶解，加入0.05ml含39mgH2SO4的水溶液，攪拌狀態(tài)下滴加3ml雷公藤內(nèi)酯醇（36mg）的CH2Cl2（或CHCl3）溶液，回流狀態(tài)下攪拌24時，放置一段時間后，出CH2Cl2層，水層再分別回3mlCH2Cl2洗滌兩次，合并有機(jī)提提液，先以飽和NaHCO3洗滌，再以水洗滌后，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濃縮后經(jīng)硅酸柱層析分離，乙醚為洗脫劑，所得雷公藤內(nèi)酯酮的流份濃縮后，以二氧甲烷-石油醚復(fù)合溶劑重結(jié)晶，得雷公藤內(nèi)酯酮。
雷公藤內(nèi)酯酮可以降低胃癌細(xì)胞中促癌的非編碼RNA的表達(dá)，使其惡性行為受到顯著抑制，在胃癌的治療上具有良好的應(yīng)用價值。雷公藤內(nèi)酯酮可以通過抑制Gli1、Gli2基因表達(dá)顯著抑制肝癌細(xì)胞的增殖，且抑制作用呈現(xiàn)明顯的劑量依賴性，雷公藤內(nèi)酯酮為Gli1、Gli2基因的有效抑制劑，可以用于制備防治肝癌的藥物。同時，由于雷公藤內(nèi)酯酮為Gli1、Gli2基因表達(dá)的有效抑制劑，雷公藤內(nèi)酯酮也可以用于制備治療Gli1、Gli2基因高表達(dá)相關(guān)的疾病的藥物。
CN201810928553.1提供雷公藤內(nèi)酯酮的用途，即雷公藤內(nèi)酯酮在制藥中的應(yīng)用。具體地，本發(fā)明提供雷公藤內(nèi)酯酮作為制備食蟹猴避孕節(jié)育藥物中的應(yīng)用。
雷公藤提取物中雷公藤總甙、雷公藤多甙、雷公藤內(nèi)酯醇具有良好的避孕效應(yīng)，但同時可產(chǎn)生免疫抑制效應(yīng)，影響其進(jìn)一步應(yīng)用。雷公藤中的一種單體——雷公藤內(nèi)酯酮(SD-1)，本發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)8-9歲雄性食蟹猴口服0.1mg/kg的劑量雷公藤內(nèi)酯酮具有良好避孕效應(yīng)，且沒有明顯的副作用，顯示出良好的應(yīng)用前景。
(1)非激素男性避孕藥SD-1在食蟹猴中有很好的避孕效果：雄性成年食蟹猴在服用劑量0.1mg/kg SD-1第5周，食蟹猴精子幾乎100％發(fā)生變形、死亡。目前最長服藥時間已達(dá)480多天，其長期避孕效果也很好。
(2)SD-1有效劑量低：食蟹猴以0.1mg/kg劑量服藥，其精子在服藥第5周時幾乎100％發(fā)生嚴(yán)重變形、死亡。
(3)SD-1避孕是可逆的：4只食蟹猴服藥后精子幾乎100％變形、死亡后，停藥5周左右，精子基本恢復(fù)正常，表明SD-1的避孕是可逆性的。
(4)SD-1是安全的避孕藥：SD-1沒有明顯的毒副作用，食蟹猴服藥期間血液常規(guī)、生化、肝功能、激素、免疫功能均沒有顯著變化，是安全有效劑量。
[1] CN201710801645.9 利用離子液體超聲提取雷公藤內(nèi)酯酮的方法
[2] CN201810109778.4 雷公藤內(nèi)酯酮用于制備Gli基因抑制劑和防治肝癌藥物的生物醫(yī)藥用途
[3] CN91108268.9 雷公藤內(nèi)酯酮的合成方法
[4] CN201810928553.1 雷公藤內(nèi)酯酮在制備食蟹猴避孕節(jié)育藥物中的應(yīng)用