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巖藻黃質(zhì)(fucoxanthin)亦稱褐藻黃素,是自可食用褐藻中,如裙帶菜(翅藻科,Undaria pinnatifida)、海帶(Laminaria japonica Aresch)中提取出來的天然類胡蘿卜素,在其剛性全反式長鏈的兩端分別有一個化學(xué)性質(zhì)活潑的5,6-環(huán)氧非飽和丙二烯鍵結(jié)構(gòu),因而又異 于其他類胡蘿卜素分子,具有很強的生物活性。近年來,它的多種生物學(xué)活性已被證實,一些潛在的活性也正在被科學(xué)家們積極探求之中,目前己成為當今海洋藥物研究與開發(fā)的主攻熱點之一。
巖藻黃質(zhì)具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化、減肥等多種生物活性。首先,在抗腫瘤方面,1990 年Okuzumi等首次報道,巖藻黃質(zhì)10μg/mL孵育3天后可降低62%的成人神經(jīng)母細胞瘤細胞 株(GOTO)的增殖。Okuztllni等研究證實,巖藻黃質(zhì)可抑制由強皮膚促癌物十四烷酞佛波醋 酸酷(TPA)誘導(dǎo)的小鼠表皮鳥氨酸脫梭酶活性增強,據(jù)此推測其可能對皮膚癌有抑制作用。
1993年okuzumi等報道,巖藻黃質(zhì)對N-乙基-N’-硝基-亞硝基胍誘導(dǎo)的十二指腸癌形成具有 抑制作用。Masashi等報道了巖藻黃質(zhì)對急性髓性白血病HL-60細胞株的作用,結(jié)果顯示巖 藻黃質(zhì)對HL-60細胞可發(fā)揮顯著的增殖抑制作用。Elichi等研究發(fā)現(xiàn),巖藻黃質(zhì)可明顯降低 前列腺癌細胞存活率,并誘導(dǎo)細胞凋亡。Swadesh K等人研究發(fā)現(xiàn)巖藻黃質(zhì)對人肝癌HePG2 細胞的生長具有抑制作用,因此,巖藻黃質(zhì)對多種腫瘤細胞具有不同程度的抑制作用。
其次,研究發(fā)現(xiàn)巖藻黃質(zhì)還具體外抗氧化活性,其抗氧化活性甚至強于維生素C和E。此外,Kenjis 等發(fā)現(xiàn)質(zhì)抑制內(nèi)毒素誘導(dǎo)的大鼠眼葡萄膜炎(Elu),且其抗炎作用與尼松龍相當。特別是近年 來研究發(fā)現(xiàn),巖藻黃質(zhì)能夠顯著的燃燒脂肪細胞,消除脂肪堆積的作用,從而起到顯著的減 肥效果,更使巖藻黃質(zhì)在減肥藥市場中占據(jù)重要的地位,因此,巖藻黃質(zhì)是一個用途廣泛的海洋活性物質(zhì)。
目前,已有一些關(guān)于巖藻黃質(zhì)提取方法的研究報道:如中國專利CN1706836A公開了一種 從海藻中分離巖藻黃質(zhì)的方法,該方法食用反復(fù)硅膠柱層析分離,且使用二甲基亞礬,不能 通過低溫減壓蒸餾方法除去,使得樣品難于在低溫條件下干燥,難于獲得高純巖藻黃質(zhì)。中 國專利CN100999508A公開了一種從褐藻中提取巖藻黃質(zhì)的方法,僅使用大孔吸附柱層析分 離,獲得的樣品含量為1~20%,純度較低。
中國專利CN102336725公開了一種從海藻中提取 含有巖藻黃質(zhì)的濃縮物的方法,該方法使用了酶處理,提取濃縮物未進行分離,純度較低。 中國專利CN102007216公開了巖藻黃質(zhì)的制備方法以及用于巖藻黃質(zhì)的微藻,該方法從培養(yǎng) 的微藻中提取制備巖藻黃質(zhì),該方法主要涉及產(chǎn)巖藻黃質(zhì)微藻的培養(yǎng),只獲得提取物質(zhì),并 未進行分離純化。
綜上所述,以上的制備方法均未能獲得高純度的巖藻黃質(zhì),不能對巖藻黃 質(zhì)以及巖藻黃質(zhì)系列產(chǎn)品進行高值化開發(fā)應(yīng)用,因此,有必要發(fā)明一種從褐藻中或其他藻類 中提取分離獲得高純巖藻黃質(zhì),以進行巖藻黃質(zhì)高值化開發(fā)應(yīng)用。
CN201210564339.5提供一種巖藻黃質(zhì)的制備方法,該方法從海藻中提取分離制得。
本發(fā)明包括以下步驟:
1)將清洗后的褐藻原料晾干,用有機溶劑浸漬,提??;
2)將步驟1)獲得的提取液濃縮,得巖藻黃質(zhì)粗提物;
3)將步驟2)獲得的巖藻黃質(zhì)粗提物采用柱層析分離,收集巖藻黃質(zhì)餾分,濃縮,得巖 藻黃質(zhì)原料;
4)將步驟3)獲得的巖藻黃質(zhì)原料用有機溶劑溶解,轉(zhuǎn)入半制備/制備型高效液相色譜 的進樣瓶中,啟動半制備/制備型高效液相色譜分離純化,通過紫外在線檢測或質(zhì)譜信號觸發(fā) 餾分收集器自動收集巖藻黃質(zhì)純化液;
5)將步驟4)收集的巖藻黃質(zhì)純化液減壓濃縮,冷凍干燥,得高純巖藻黃質(zhì)。
CN201510407570.7提供一種水溶性巖藻黃質(zhì)干粉的制作方法,本發(fā)明的巖藻黃質(zhì)經(jīng)過油溶、乳化、包合、固體分散作用,提高了巖藻黃質(zhì)在水中溶解度,能更好應(yīng)用于保健品和功能性食品,并提高巖藻黃質(zhì)生物利用度。
本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下:一種水溶性巖藻黃質(zhì)干粉的制作方法,包括如下步驟:
(1)取1重量份的質(zhì)量百分含量為30%的巖藻黃質(zhì),加入2~4重量份的植物油,再加入抗氧化劑,混合均勻后,得到溶液A,所述溶液A中抗氧化劑的質(zhì)量百分含量為0.5~1%,攪拌加熱至90~100℃,待巖藻黃質(zhì)完全溶解后,得到巖藻黃質(zhì)油溶液;
(2)取水溶性輔料,加入純水,配制成質(zhì)量分數(shù)為30~50%的固形物溶液,并加熱至50~60℃,得到溶液B;
(3)在高速剪切分散乳化機攪拌下,將4~7重量份的乳化劑和100重量份的步驟(1)所得巖藻黃質(zhì)油溶液,依次加入步驟(2)所得溶液B中,得到混合液,并用高速剪切分散乳化機以8000~12000r/min的轉(zhuǎn)速將上述混合液剪切15~50min,再經(jīng)高壓均質(zhì)機,在20~50Mpa循環(huán)均質(zhì)15~50min,得到溶液C;
(4)將步驟(3)所得溶液C,經(jīng)噴霧干燥,即得巖藻黃質(zhì)水溶性干粉。
一種銅藻中巖藻黃質(zhì)的測定方法,其特征在于:使用高效液相色 譜法測定,包括如下操作步驟:
(1)銅藻預(yù)處理:將新鮮的銅藻用清水洗凈,低溫冷凍后,使用超高轉(zhuǎn)速破碎機破碎,過 篩網(wǎng),密封避光儲存于-20℃冰箱中;
(2)配制巖藻黃質(zhì)標準貯備液:準確稱取0.01g巖藻黃質(zhì),精確至0.0001g,用丙酮定容 至100ml,配置為100μg/ml的標準貯備液;
(3)配制巖藻黃質(zhì)標準工作液:取上步巖藻黃質(zhì)標準貯備液,用流動相稀釋成濃度范圍 為0.02~10μg/ml的標準工作液。
(4)樣品處理:稱取粉碎后的樣品0.5g置于50ml塑料離心管中,精確至0.01g,加入 40ml60%的乙醇溶液,超聲提取10-40min,放入離心機中離心提取5-20min將提取液轉(zhuǎn)移至 50ml容量瓶,定容至50ml,過0.45μm微孔濾膜制得試樣提取液;
(5)標準曲線繪制:取若干份濃度不同的標準工作液進行進樣分析,繪制出進樣濃度與 峰面積的線性曲線;
(6)濃度測試:對試樣提取液進行高效液相色譜分析,測得峰面積,通過標準曲線,得到 試樣提取液巖藻黃質(zhì)濃度;
(7)計算:試樣中巖藻黃質(zhì)的含量按下式計算,結(jié)果保留三位有效數(shù)字:
X=(C*V)/m
式中:X ——試樣中巖藻黃質(zhì)的含量,單位為毫克每克(mg/g);
C ——由線性標準曲線計算得到的巖藻黃質(zhì)濃度,單位為毫克每毫升(mg/mL);
V ——試樣提取液最終定容體積,單位為毫升(mL);
m ——稱取的試樣質(zhì)量,單位為克(g)。
[1]CN201210564339.5 巖藻黃質(zhì)的制備方法
[2]CN201510407570.7 一種水溶性巖藻黃質(zhì)干粉的制作方法
[3]CN201710357606.4 一種銅藻中巖藻黃質(zhì)的測定方法