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31282-04-9 / ?潮霉素B的使用方法

潮霉素B(Hygromycin B)是一種由吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)產(chǎn)生的抗生素,是氨基糖苷類抗生素之一,為微黃褐色粉末。潮霉素B可通過(guò)抑制細(xì)菌、真菌和一些高等真核生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)生物合成來(lái)殺死這些生物。潮霉素B可溶于甲醇、乙醇和水,但在乙醚、氯仿或苯中都幾乎不溶。

?潮霉素B的使用方法

作用機(jī)理

潮霉素B與大多數(shù)氨基糖苷類抗生素一樣,通過(guò)抑制蛋白質(zhì)的合成來(lái)阻止微生物生長(zhǎng)。它可以穩(wěn)定核糖體大亞基上的tRNA結(jié)合位點(diǎn),導(dǎo)致空載tRNA不能脫離核糖體,抑制了翻譯的繼續(xù)進(jìn)行,潮霉素的抑制作用對(duì)于原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的核糖體都是有效的。

在研究中的用途

實(shí)驗(yàn)室中使用的瓶裝潮霉素B

在實(shí)驗(yàn)室中,潮霉素B被用于選擇和保持擁有潮霉素抗性基因的原核和真核細(xì)胞。潮霉素抗性基因編碼一個(gè)激酶(潮霉素激酶),它通過(guò)磷酸化潮霉素B使其失活。自從潮霉素的抗性基因被發(fā)現(xiàn)以來(lái),潮霉素B就被用來(lái)作為轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)中的標(biāo)準(zhǔn)篩選方法。目前植物組織培養(yǎng)中常用潮霉素B進(jìn)行篩選。

使用方法

1. 儲(chǔ)存液(100μg/μl) 吉瑪基因提供經(jīng)0.22μm 濾器過(guò)濾的潮霉素B 儲(chǔ)存液。 2. 常用篩選濃度 潮霉素B 用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,培養(yǎng)基,生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變 化,推薦使用濃度為50-1000μg/ml。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)篩選出最小致死濃度。