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苯胺藍(lán)(水溶)(AinlinblueW.5.,AnB)曾用作酸堿指示劑,在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)中用作神經(jīng)組織、細(xì)胞質(zhì)等的染色劑川,未見用作分析試劑的報(bào)道。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),在pH2.1的Brit-otoRoibnson緩沖介質(zhì)存在的苯胺藍(lán)(水溶)溶液中加人BSA,溶液發(fā)生減色效應(yīng)?？梢宰鳛榈鞍踪|(zhì)的吸光探針。在最佳反應(yīng)條件下,苯胺藍(lán)(水溶)溶液的最大吸收峰在600nm,苯胺藍(lán)(水溶)與BSA相互作用形成復(fù)合物后,溶液發(fā)生減色,其最大吸收峰仍在600nm波長處,以試劑空白為參比時,在600nm波長處形成一波谷,在678nm波長處形成一波峰,波峰和波谷的吸光度絕對值均與BSA的濃度呈良好的線性關(guān)系,可用于蛋白質(zhì)的定量測定。
苯胺藍(lán)(水溶)熒光染色法觀察匍匐翦股穎葉片組織
S1、進(jìn)行藥品的配制；
S11、將福爾馬林10ml、乙酸3ml、50％的乙醇87ml、5ml甘油混合均勻，得FAA固定液；
S12、將無水乙醇與二甲苯以1：1的比例混合配制成1/2二甲苯；
S13、稱取0.1g苯胺藍(lán)(水溶)溶解于100ml濃度為0.07mol/L，pH＝7的磷酸緩沖液中，得0.1％的苯胺藍(lán)(水溶)熒光染色劑。
S2、制作石蠟切片；
S21、用鋒利的刀片快速取下寬度約0.8mm的匍匐剪股穎葉片，將葉片切割成長度約5mm左右小段，放入青霉素小瓶中，加入步驟S11所得的FAA固定液，固定12h；
S22、經(jīng)FAA固定后，依次置換15％、30％、50％、70％、85％乙醇中進(jìn)行梯度脫水，各脫水20min，于95％乙醇中脫水30mim，無水乙醇中脫水兩次，各20min；然后依次置換1/2二甲苯、二甲苯進(jìn)行透明，于1/2二甲苯中透明1h，二甲苯中透明兩次，每次30min，至材料完全透明為止；
S23、在裝有所得透明材料的青霉素小瓶中加碎蠟兩次，第一次加入與瓶中二甲苯等量的碎蠟，放入電熱鼓風(fēng)干燥箱中溫度36℃保持1h至所加碎蠟完全融化后，加入瓶中液體一半的碎蠟，放入電熱鼓風(fēng)干燥箱中調(diào)節(jié)溫度至36℃過夜后，調(diào)節(jié)溫度至42℃，置換50％石蠟保持1h后，溫度調(diào)至50℃，置換75％的石蠟保持30min后，調(diào)節(jié)溫度至60℃，依次置換純石蠟A、純石蠟B、純石蠟C各30min，然后采用TKY-BMB型石蠟包埋機(jī)進(jìn)行包埋，一個蠟塊中一個材料，蠟塊的尺寸為：0.5cm×0.5cm×0.5cm，將包埋好的蠟塊冷卻后直接修塊，進(jìn)行切片或保存到4℃冰箱備用；
S24、采用輪式手動切片機(jī)進(jìn)行連續(xù)切片，厚度10μm；將HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋溫度調(diào)節(jié)至45℃，在500ml大燒杯加入蒸餾水放入水浴鍋中，將切好的蠟帶放入燒杯中，待蠟帶完全展開后，將涂抹好蛋清甘油的載玻片伸入燒杯中，使蠟帶粘到載玻片上，將粘有蠟帶的載玻片自然晾干后，在光學(xué)顯微鏡下觀察展片效果，取展片效果好的片子置于電熱鼓風(fēng)干燥箱中于38℃下烘烤，直到片子完全干燥；
S25、取干燥的片子，依次放到分別加有二甲苯、1/2二甲苯、95％的乙醇、85％的乙醇、70％的乙醇、50％的乙醇、30％的乙醇、磷酸緩沖液、0.1％的苯胺藍(lán)染色劑的立式染缸中；在二甲苯、1/2二甲苯中各5min，95％的乙醇、85％的乙醇、70％的乙醇、50％的乙醇、30％的乙醇中各5S，磷酸緩沖液中10min，0.1％的苯胺藍(lán)(水溶)染色劑中30min；然后將染色后的片子取出，置于蒸餾水中30S，洗凈片子上的雜質(zhì)后，過1/2二甲苯、二甲苯各10S，待片子干燥后采用中性樹膠封片；
S26、將所得的片子自然風(fēng)干后，置于LeiCaDM6000B熒光顯微鏡下觀察并拍照。
[1] 黎雪蓮, 袁若, 柴雅琴, 張凌燕, 王娜, & 朱強(qiáng). (2006). 基于靜電吸附甲苯胺藍(lán)和納米金固定過氧化物酶生物傳感器的研究. 分析化學(xué), 34(3), 389-392.
[2] 肖錫林, 王永生, 李貴榮, & 呂昌銀. (2004). 甲苯胺藍(lán)共振光散射法測定納克級脫氧核糖核酸. 光譜學(xué)與光譜分析, 24(2), 190-193.
[3] 趙香汝, 王家鑫, & 崔平. (2000). 肥大細(xì)胞用甲苯胺藍(lán)染色之體會. 中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志, 9(3), 359-359.