28718-90-3 / DAPI溶液的用途和使用方法

背景及概述^[1]

DAPI溶液，也稱(chēng)DAPI dihydrochloride，是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生比DAPI自身強(qiáng)20多倍的熒光。和EB(ethidium bromide)相比，對(duì)雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。因?yàn)镈API是含有特定AT序列DNA的一種嵌入劑，它能像Hoechst染料一樣粘附在DNA雙螺旋的小溝區(qū)。

盡管DAPI不能通過(guò)活細(xì)胞膜，但卻能穿透擾亂的細(xì)胞膜而對(duì)核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用來(lái)檢測(cè)酵母線粒體DNA，葉綠體DNA，病毒DNA，microplasm DNA以及染色體DNA。DAPI-DNA復(fù)合物的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為360nm和460nm。

DAPI染色常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。DAPI也常用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。

DAPI溶液使用過(guò)程^[1]

1、用1mLddH₂O將DAPI溶解，制得2.9mM的DAPI溶液（1mgDAPI/1mL H2O）。

注：DAPI不能直接用PBS等緩沖溶液溶解，需要先用水將其溶解。

2、取適量DAPI水溶液加到PBS中，制備成10~50µM的DAPI溶液。 推薦以下PBS的配制方法： 將8.00g NaCl、0.20g KCl、2.9g Na₂HPO₄·12H₂O、0.2g KH₂PO₄溶解于1L純水中。

3、將1/10培養(yǎng)基體積的DAPI溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中。也可以1/10濃度的DAPI緩沖液代替培養(yǎng)基。

4、在37℃培養(yǎng)細(xì)胞10~20分鐘。

5、用PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。

6、用帶有360nm激發(fā)波長(zhǎng)，460nm發(fā)射波長(zhǎng)的濾光片的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。

應(yīng)用舉例^[2-3]

CN201910732262.X公開(kāi)了一種快速鑒別人源細(xì)胞和小鼠源細(xì)胞的方法，包括步驟：提供人源性/小鼠源性鑒定樣本，用DAPI溶液孵育，再清洗樣本，然后在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察鑒別：細(xì)胞核存在DAPI聚集斑的是小鼠來(lái)源樣本，細(xì)胞核無(wú)DAPI聚集斑的樣本來(lái)源于人。本發(fā)明在試劑和材料方面的損耗成本低廉，在熒光顯微鏡下即可進(jìn)行觀察實(shí)驗(yàn)，成本大概在20元/樣，普通實(shí)驗(yàn)室均可以輕易實(shí)現(xiàn)；本發(fā)明鑒別操作流程簡(jiǎn)單，一般實(shí)驗(yàn)者均可輕易掌握操作；實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以在半個(gè)小時(shí)內(nèi)即可得出，極大減少了時(shí)間成本；該方法彌補(bǔ)了現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，可以在普通實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行人源樣本和小鼠源樣本的快速分辨，有效增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室樣本鑒別頻率，避免交叉污染、減少不必要的損失。

CN201410059881.4報(bào)道了一種采用雙核法檢測(cè)卷煙主流煙氣總粒相物遺傳毒性的方法，其特征在于：選用人支氣管上皮細(xì)胞系BEAS-2B細(xì)胞作為評(píng)價(jià)體系，將細(xì)胞接種于培養(yǎng)皿中，加入卷煙煙氣總粒相物樣品進(jìn)行暴露，暴露過(guò)的細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)和甲醇溶液固定，采用DAPI溶液染色并在熒光顯微鏡下拍照計(jì)數(shù)，每個(gè)樣品計(jì)數(shù)1000個(gè)雙核細(xì)胞中含微核的細(xì)胞數(shù)量，與對(duì)照樣品相比，通過(guò)分析微核增加的數(shù)量，進(jìn)而判斷煙氣遺傳毒性的大小。本發(fā)明采用煙氣作用于人體的靶器官來(lái)源細(xì)胞進(jìn)行卷煙煙氣遺傳毒性評(píng)價(jià)，針對(duì)性更強(qiáng)；實(shí)驗(yàn)過(guò)程中無(wú)需加入代謝活化體系(大鼠肝S9混合液)，熒光染色直接在細(xì)胞培養(yǎng)皿中進(jìn)行無(wú)需轉(zhuǎn)移至載玻片，具有操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，結(jié)果可靠等特點(diǎn)。

注意事項(xiàng)^[1]

1、DAPI對(duì)人體有一定刺激性，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。

2、熒光染料都存在淬滅的問(wèn)題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)。

3、為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。

4、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

主要參考資料

[1]DAPI溶液配制與使用方法

[2]CN201910732262.X一種鑒別人源細(xì)胞和小鼠源細(xì)胞的方法

[3]CN201410059881.4采用雙核法檢測(cè)卷煙主流煙氣總粒相物遺傳毒性的方法