26048-05-5 / 白僵菌的制備方法

概述^[1]

白僵菌是一種子囊菌類的蟲生真菌，主要種類包括球孢白僵菌和布氏白僵菌等，常通過無性繁殖生成分生孢子，菌絲有橫隔有分枝。白僵菌可以侵入6個目15科200多種昆蟲、螨類的蟲體內大量繁殖，同時產(chǎn)生白僵素(非核糖體多肽類毒素)、卵孢霉素(苯醌類毒素)和草酸鈣結晶，這些物質可引起昆蟲中毒，打亂新陳代謝以致死亡。其中，球孢白僵菌為子囊菌類的真菌，可工業(yè)化培養(yǎng)生產(chǎn)，人們利用其產(chǎn)生的分子孢子可加工成微生物殺蟲劑。

在害蟲病原微生物中，因真菌致病的最多（細菌，病毒），居60%以上，而在昆蟲的真菌病中，由白僵菌引起的占20%以上?？梢?，白僵菌是昆蟲重要的病原菌之一。白僵菌在世界分布極廣，歐、亞、非、澳、南北美洲都有，就國家來說有20-30個。白僵菌的寄主范圍很廣，主要寄生于鱗翅目、同翅目、膜翅目、直翅目等的200多種昆蟲和螨類，而且致病力強，可用于防治松毛蟲、玉米螟、大豆食心蟲、高粱條螟、甘薯象鼻蟲、馬鈴薯甲蟲、茶葉毒蛾、松針毒蛾、稻苞蟲、稻葉蟬、稻飛虱等害蟲，具有使用方便、對人畜安全、不污染環(huán)境、不殺害天敵、經(jīng)濟有效等優(yōu)點，已成為我國防治森林害蟲的主要微生物殺蟲劑之一。

制備方法^[2]

一種殺蟲白僵菌菌粉的工業(yè)化生產(chǎn)方法，其應用了一種殺蟲白僵菌菌粉的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基包括斜面培養(yǎng)基、二級液體擴大培養(yǎng)基、三級固體擴大培養(yǎng)基；所述斜面培養(yǎng)基的組成成分以重量百分數(shù)計分別為：馬鈴薯20%、白砂糖1%、瓊脂1%、水78%；所述二級液體擴大培養(yǎng)基的組成成分以重量百分數(shù)計分別為：黃豆粉1%、玉米粉1%、白砂糖1%、尿素0.02%、蛋白胨0.02%、磷酸二氫鉀0.02%，水96.94%；所述三級固體擴大培養(yǎng)基的組成成分以重量百分數(shù)計分別為：麥麩60%、谷殼40%；所述黃豆粉、玉米粉的粒度為300-500目；所述馬鈴薯的制備方法為先將馬鈴薯去皮，再切片煮30min，過濾得到；

具體包括以下步驟：

步驟1、斜面菌種培養(yǎng)：取馬鈴薯、白砂糖、瓊脂、水按比例混合制得斜面培養(yǎng)基，將以白僵蟲為標本，不斷的分離提純而獲得的原菌種放入斜面培養(yǎng)基接種，接種后的斜面培養(yǎng)基放入22℃恒溫箱內培養(yǎng)，第1-2天著重檢查有無細菌生長，如見斜面上有粘稠具光澤的薄膜出現(xiàn)即為細菌污染，應去掉，繼續(xù)觀察有無細菌生長，如有則重復上述操作至第15天，如無其他雜菌，則第一批斜面菌種制備完成；所述制備斜面菌種的批數(shù)是根據(jù)生產(chǎn)量而定的，每批的生產(chǎn)量在10噸以上；

步驟2、二級液體擴大培養(yǎng)：取黃豆粉、玉米粉、白砂糖、尿素、蛋白胨、磷酸二氫鉀、水按比例混合制得二級液體擴大培養(yǎng)基，將配好的二級液體培養(yǎng)基裝入容量為1000L的三角瓶內，裝量為三角瓶容量的1/3，塞好瓶塞，高壓滅菌，在無菌條件下每瓶接種一支試管步驟1制得的斜面菌種，接2瓶，接種后的二級液體擴大培養(yǎng)基置于往復式搖床上震蕩10h，溫度控制在22℃，頻率80次/min，用電子顯微鏡檢測孢子發(fā)芽率在85%以上即可做為二級液體菌種；

步驟3、三級固體擴大培養(yǎng)：取麥麩、谷殼按比例進行混合均勻制得三級固體擴大培養(yǎng)基，將5kg三級固體擴大培養(yǎng)基裝入布袋或纖維袋，扎緊袋口置于滅菌鍋爐中消毒，滅菌后的三級固體擴大培養(yǎng)基按20%的接種量加入步驟2制得的二級液體菌種，培養(yǎng)室及用具徹底消毒后，將接種后的三級固體擴大培養(yǎng)基平鋪在簸箕內，厚度為0.6寸，進行淺盤發(fā)酵制得白僵菌；所述培養(yǎng)室及用具徹底消毒的步驟為：將用具在接種前洗凈晾干放入培養(yǎng)室，然后將培養(yǎng)室用硫磺或40%的甲醛熏蒸；所述淺盤發(fā)酵的具體步驟為：第1-5天內溫度控制在22℃，當溫度達到26℃時，打開窗門或用風扇進行降溫至20℃，共計淺盤發(fā)酵15天；

步驟4、干燥、粉碎：將步驟3制得的白僵菌經(jīng)烘干、粉碎由輸送帶輸入儲存罐中，再進行包裝，貯存；所述烘干操作在烘干房中進行，烘干房采用煤爐、電爐、暖氣片加溫，烘干溫度30℃，烘干時間3天；粉碎收集時，白僵菌粉的細度在40目篩以上，待儲存罐收有的菌粉含孢量為100億/g時，將菌粉分袋包裝，此時菌粉的活孢子率在85%以上。

主要參考資料

[1] 劉銀泉, 馮明光, & 劉樹生. (1999). 球孢白僵菌對桃蚜的毒力測定. 植物保護學報, 26(4), 347-352.

[2] 孫繼美, 丁珊, & 肖華. . 球孢白僵菌防治松褐天牛的研究. 中國森林病蟲, 000(003), 16.

[3] 劉健, 陳洪章, & 李佐虎. (2003). 白僵菌殺蟲劑生產(chǎn)工藝研究狀況與展望. 中國生物防治學報, 19(2), 86-90.