192569-17-8 / 依普利酮雜質(zhì)7的制備方法

背景及概述^[1][2]

依普利酮雜質(zhì)7即11-羥基坎利酮，是合成依普利酮的起始原料。依普利酮主要用于治療原發(fā)性高血壓以及心肌梗塞后的心力衰竭的藥物，也是第一個(gè)獲準(zhǔn)上市的選擇性醛固酮受體阻斷劑。在體內(nèi)由CYP4503A4代謝，半衰期為4～6小時(shí)。依普利酮可用于提高急性心臟病發(fā)作后的充血性心力衰竭患者的生存率。

應(yīng)用^[1]

依普利酮雜質(zhì)7即化合物A。

制備^[2]

菌種與培養(yǎng)基

菌株 : 赭曲霉( Aspergillus ochraceus) NG0216。

斜面培養(yǎng)基 : PDA 培養(yǎng)基 。

發(fā)酵培養(yǎng)基( g/L) : 葡萄糖 10, 玉米漿 15, 酵母膏 1. 0, pH 5. 8, 121 ℃ 0. 1 MPa 滅菌 15 min 。轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基( g/L) : 葡萄糖 5, 玉米漿 15, 酵母膏1. 0, 坎利酮 10, 七水硫酸鎂 0. 9, pH 5. 8, 超聲處理( 12. 4 W/cm²) 10 min 。

步驟如下：

1. 赭曲霉NG0216的培養(yǎng)

孢子接種于斜面,28℃擴(kuò)增5～7d,擴(kuò)增孢子制成孢子懸浮液(108個(gè)/mL)后按7%接種量,溫度28℃下150r/min培養(yǎng)24h,抽濾得濕菌體,洗滌后備用。

2. 細(xì)胞的固定化

聚乙烯醇-硼酸凝膠:8g聚乙烯醇加75mL無(wú)菌水,80℃攪拌溶解,冷卻至40℃后與菌懸液(15g濕菌體加25mL無(wú)菌水)混合均勻,用8#注射針頭滴入5%硼酸溶液中,4℃放置1h,制成直徑2mm左右的顆粒?？ɡz凝膠:3g鈉型K-卡拉膠加75mL無(wú)菌水,40℃攪拌溶化,30℃保溫;再與30℃保溫的菌懸液(同上)混合均勻,用8#注射針頭滴入0.15mol/LK2SO4溶液中,4℃放置1h,制成直徑約2mm的顆粒。海藻酸鈣凝膠:4%的海藻酸鈉溶液75mL與菌懸液(同上)混合均勻,用8#注射針頭滴入5%的氯化鈣溶液中,靜置固化1h,得到直徑約2mm的顆粒。

3. 固定化細(xì)胞轉(zhuǎn)化方法

分別將“2”中制備的固定化顆粒加入含100mL轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基的500mL搖瓶中,26℃,150r/min轉(zhuǎn)化48h,過(guò)程中控制葡萄糖濃度在2.5～5.0g/L之間。

4. 轉(zhuǎn)化率的測(cè)定

采用文獻(xiàn)的HPLC法測(cè)定。

5. 坎利酮及產(chǎn)物溶解度的測(cè)定

按文獻(xiàn)的方法測(cè)定坎利酮及產(chǎn)物粗品在乙酸乙酯中的溶解度。

6. 產(chǎn)物純品的制備

轉(zhuǎn)化結(jié)束,單層紗布過(guò)濾,濾液抽率得到產(chǎn)物粗品,去離子水清洗兩遍后50℃真空干燥,測(cè)定轉(zhuǎn)化率。以溶解度為基礎(chǔ),稱(chēng)取一定量粗品于結(jié)晶器中,加入100mL乙酸乙酯,攪拌、升溫至55℃完全溶解后在KF-49冷井中控溫漸冷至15℃,放置2h,抽濾晶漿得純化結(jié)晶,50℃真空干燥后重結(jié)晶多次,得產(chǎn)物純品結(jié)晶。

主要參考資料

[1]商艷梅,鄭忠輝,趙淑娟.依普利酮的合成[J].藥學(xué)研究,2015,34(06):365-367.

[2]茅燕勇,毛斌,范偉平.固定化赭曲霉NG0216細(xì)胞羥基化坎利酮[J].生物加工過(guò)程,2005(02):45-49.