189950-66-1 / Ac-DEVD-pNA的制備

概述^[1]

Caspase全稱為含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase)。caspase是一組存在于細(xì)胞質(zhì)中具有類似結(jié)構(gòu)的蛋白酶。Caspase與真核細(xì)胞凋亡密切相關(guān)，并參與細(xì)胞的生長、分化與凋亡調(diào)節(jié)。Caspase是一類蛋白酶家族，成員較多，在人類，已經(jīng)鑒定了11種不同的caspase，根據(jù)其蛋白酶序列的同源性可分為3個(gè)亞族：Caspase-1亞族包括 Caspase-1、4、5、11；Caspase-2亞族包括Caspase-2、9； Caspase-3亞族包括Caspase-3、6、7、8、10。作為caspase-3/7的首選肽類底物，Ac-DEVD-pNA和Ac-DEVD-AMC被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、化學(xué)生物學(xué)和藥用化學(xué)領(lǐng)域中。目前，Ac-DEVD-pNA主要用于檢測細(xì)胞中caspase-3和caspase-7的活性，也用于鑒定和評估caspase-3和caspase-7抑制劑和procaspase-3/7的小分子激活劑。其具體作用機(jī)理是：Caspase-3或caspase-7催化Ac-DEVD-pNA的水解，繼而釋放出發(fā)色基團(tuán)對硝基苯胺，通過對對硝基苯胺發(fā)色強(qiáng)度的檢測，相應(yīng)檢測出體內(nèi)caspase-3或caspase-7的活性大小。

制備^[1]

Ac-DEVD-pNA制備如下：

1）合成Ac-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Val-Asp(OtBu)-pNA

取Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Val-Asp(OtBu)-pNA(1.44g，1.8mmol)，DCM40ml加入到圓底燒瓶中，攪拌反應(yīng)，乙酸、三乙胺再緩緩滴加到到反應(yīng)液中，反應(yīng)液立即變?yōu)榄傊瑺睿貌ＡО魯嚢?，再加入二氯甲院，避光反?yīng)，完全反應(yīng)。真空濃縮再用乙醚碾磨，真空過濾，干燥得到白色固體粉末1.32g，產(chǎn)率91%。

反應(yīng)方程式：

2）合成目標(biāo)產(chǎn)物Ac-DEVD-pNA

取1.32gAc-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Val-Asp(OtBu)-pNA加入到三氟乙酸/二氯甲烷溶液中，反應(yīng)液慢慢澄清，室溫下避光撹拌反應(yīng)，真空濃縮，殘留液用乙醚碾磨三次，然后真空過濾，干燥得到白色稍帶淺棕色粉末固體0.96g，產(chǎn)率為91.4%。反應(yīng)方程式：

主要參考資料

[1] Caspase-3/7底物的合成及其相關(guān)熒光分子合成新方法的研究