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L-異亮氨酸甲酯是L-異亮氨酸的保護形式。L-異亮氨酸被歸類為必需氨基酸,學名2-氨基-3-甲基戊酸,疏水性氨基酸之一。L-異亮氨酸是組成蛋白質的20種氨基酸的一種支鏈氨基酸,有兩個不對稱碳原子,是哺乳動物的必需氨基酸和生酮氨基酸,并且也是大鼠中膀胱癌的腫瘤啟動子。L-異亮氨酸甲酯鹽酸鹽是一種生化試劑,也可以用作醫(yī)藥中間體,是白色細粉末晶體。
L-異亮氨酸甲酯鹽酸鹽常規(guī)的檢測方法是銀量法,即在L-異亮氨酸甲酯鹽酸鹽溶液中,加入指示劑鉻酸鉀,用硝酸銀標準溶液滴定,氯化銀先沉淀,當磚紅色的鉻酸銀沉淀生成時,表明Cl離子已被定量沉淀,指示終點已經(jīng)到達。但是用鉻酸鉀指示劑法,必須在近中性或弱堿性溶液(pH6.5~10.5)中進行滴定,若在酸性溶液中進行,CrO42-與H+結合,降低CrO42-濃度,在等當點時不能立即生成鉻酸銀沉淀,此法也不 能在堿性溶液中進行,因銀離子氫氧根離子生成氧化銀沉淀;而且此法是依靠指示劑顏色變化來指示滴定終點,如果待測溶液有顏色或渾濁時,終點的指示就比較困難,誤差大。
L-異亮氨酸甲酯鹽酸鹽是一種生化試劑,也可以用作醫(yī)藥中間體。
方法1:一種 L-異亮氨酸甲酯鹽酸鹽含量的檢測方法,屬于電位滴定法,是在滴定過程中通過測量電位變化以確定滴定終點 的方法,進行電位滴定時,被測溶液中插入一個參比電極,一個指示電極組成工作電池。隨著滴定劑的加入,由于發(fā)生化學反應,被測離子濃度不斷變化,指示電極的電位也相應地變化。在等當點附近發(fā)生電位的突躍。因此測量工作電池電 動勢的變化,可確定滴定終點。所述方法包括如下步驟:
(1)配制供試品:精密稱取L-異亮氨酸甲酯鹽酸鹽0.5g,加無水甲酸5mL 溶解后移入100mL容量瓶中,然后加水至刻度線即得供試品;
(2)檢測:將步驟(1)所配的供試品用硝酸銀標準溶液進行滴定,用甘汞 電極作為參比電極,用銀電極作為指示電極;當電極電位發(fā)生突躍時,則滴定到達終點,記錄硝酸銀標準溶液用量并計算得出含量結果。所述硝酸銀標準溶液的濃度為0.01mol/L。與現(xiàn)有技術相比,優(yōu)點是能準確判斷滴定終點、誤差小,還能實現(xiàn)自動化和連續(xù)測定。
方法2:有研究采用衍生化為輔助手段,建立高效液相色譜法測定質L-異亮氨酸甲酯鹽酸鹽含量的方法。采用島津VP-ODS C18色譜柱(150 mm×4.6 mm,5μm);以乙酸鈉緩沖液(pH 7.2)-甲醇-乙腈(20∶45∶30)為流動相,流速為1.0 mL/min;檢測波長為262 nm;柱溫為40℃。采用9-芴基甲酰氯為衍生化試劑,考察衍生化試劑濃度,反應靜置時間,超聲時間等衍生化條件,確定衍生化的方法并進行方法學驗證。結果顯示衍生化反應條件為:衍生化試劑濃度10 mg/mL,反應靜置時間20 min,超聲10 s。經(jīng)方法學驗證,L-異亮氨酸甲酯鹽酸鹽在15~75μg/mL范圍內線性良好,其平均回收率為92.943%,RSD為4.965%,溶液在5 h內穩(wěn)定性。結論:該方法簡便、快速、耐受性好,符合有關物質方法學驗證要求,可用于雜質L-異亮氨酸甲酯鹽酸鹽的含量測定。
[1] CN201010184848.6一種L-異亮氨酸甲酯鹽酸鹽含量的檢測方法
[2] 殷靜, 常艷. 高效液相色譜法測定 L-纈氨酸甲酯鹽酸鹽中 L-異亮氨酸甲酯鹽酸鹽[J]. 中國新藥雜志, 2012, 21(18): 2137-2140.