172426-87-8 / 加替沙星雜質(zhì)的檢測(cè)方法

背景及概述^[1]

加替沙星(Gatifloxacin)是一種新合成的第四代喹諾酮類(lèi)抗菌藥，由日本杏林(Kyorin)公司研究開(kāi)發(fā)，目前美國(guó)布邁-施貴寶(Bristol-MyersSquibb)公司已獲得該藥在加拿大、巴西、墨西哥、阿根廷等國(guó)家的銷(xiāo)售權(quán)，1999年6月向美國(guó)FDA提出本品口服和靜脈注射制劑的上市申請(qǐng)，同年11月獲得批準(zhǔn)在美國(guó)上市，商品名為T(mén)equin。而加替沙星用于治療眼部細(xì)菌感染方面的研究工作也已經(jīng)展開(kāi)，且已經(jīng)開(kāi)始臨床工作。加替沙星與環(huán)丙沙星，氧氟沙星等喹諾酮抗菌藥的結(jié)構(gòu)不同，C7位為2-甲基哌嗪基，C8位是甲氧基，因此抗菌譜增加，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌、陰性菌和衣原體、支原體等的抗菌活性增強(qiáng)，且很少產(chǎn)生耐藥性。加替沙星的作用機(jī)制為抑制細(xì)菌DNA促旋酶和拓?fù)洚悩?gòu)酶IV的活性，其IC50分別為0.1和13.8mg/L活性強(qiáng)于司帕沙星、氧氟沙星和左氟沙星(levfloxacin)，弱于環(huán)丙沙星和克林沙星(clinflo-xacin)，但對(duì)人類(lèi)Hela細(xì)胞拓?fù)洚悩?gòu)酶II的IC50為265mg/L，因此加替沙星對(duì)細(xì)菌拓?fù)洚悩?gòu)酶具有高度選擇性，可以降低毒副作用。加替沙星雜質(zhì)包括合成過(guò)程中以及儲(chǔ)存過(guò)程成產(chǎn)生的雜質(zhì)。

檢測(cè)方法^[1]

通過(guò)具有熒光檢測(cè)的反相HPLC測(cè)量加替沙星尿液中代謝物（加替沙星雜質(zhì)）的濃度。提取尿液樣品（各0.5ml），將提取的殘余物用0.2ml乙腈和0.01M磷酸（10:90，體積/體積）的混合物溶解，然后將一部分（5ml）注入HPLC系統(tǒng)。該柱是TSKgelOctyl-80TS（4.6×150mm；Tosoh）。洗脫的流動(dòng)相是乙腈，四氫呋喃和含有1mM1-辛烷磺酸鈉的0.01M磷酸（14：2：84，體積/體積）的混合物。流速設(shè)定為1.5毫升/分鐘。熒光檢測(cè)器的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別設(shè)定在285和490nm。內(nèi)標(biāo)（吡哌酸），加替沙星雜質(zhì)和未改變的藥物的保留時(shí)間分別為7.0，18.7和25.1分鐘。色譜圖在任何代謝物或內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間均未顯示干擾峰。濃度由標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)曲線計(jì)算，所述標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)曲線通過(guò)峰高比的線性回歸構(gòu)建，作為加標(biāo)濃度的函數(shù)。校準(zhǔn)曲線在0.05至2mg/ml的濃度范圍內(nèi)是線性的。在0.05mg/ml時(shí)，日內(nèi)變異系數(shù)小于17.5％，在0.2和2mg/ml時(shí)小于6％。

主要參考資料

[1] Single- and Multiple-Dose Pharmacokinetics of AM-1155, a New 6-Fluoro-8-Methoxy Quinolone, in Humans