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細(xì)菌產(chǎn)生的一系列揮發(fā)性物質(zhì)(VCs)，包括醛類、酯類、醇類、酸類和酮類等，這些揮發(fā)性化合物有廣譜的抗菌作用，對(duì)植物病原菌有一定的抑制作用，對(duì)線蟲(chóng)有較強(qiáng)的致死效果，能促進(jìn)植物生長(zhǎng)，誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗病作用。2-十一醇為枯草芽孢桿菌中揮發(fā)性物質(zhì)的成分之一，其具有廣譜的抗菌作用。
步驟1）：揮發(fā)性物質(zhì)的產(chǎn)生與收集
將產(chǎn)該揮發(fā)性物質(zhì)的枯草芽孢桿菌(Bacilliussubtilis)Jaased1菌株接種到加入滅菌磁力攪拌子的LB培養(yǎng)液中(所述的LB培養(yǎng)液為酵母粉5％，NaCl10％，蛋白胨10％，pH＝7)，在37℃、120r/min條件下振蕩培養(yǎng)24h，培養(yǎng)好后將培養(yǎng)瓶置于磁力攪拌器上50℃攪拌30min。將DVB/CAR/PDMS萃取頭在270℃條件下老化30min，垂直插入培養(yǎng)瓶后，伸出萃取頭，使萃取頭在培養(yǎng)液液面上方2cm處，對(duì)Jaased1所產(chǎn)的揮發(fā)性氣體進(jìn)行固相微萃取，萃取30min后，萃取頭上可萃取到揮發(fā)性氣體。
步驟2）：揮發(fā)性氣體的測(cè)定
揮發(fā)性氣體用熱電TraceDsq氣質(zhì)聯(lián)用儀測(cè)定。將萃取頭在210℃進(jìn)樣口解析5min，采用無(wú)分流模式，載氣為He，流速為1.0ml/min，升溫程序?yàn)?3℃，3min，以10℃/min速度升溫至180℃，再以40℃/min速度升溫至220℃，保持5min；質(zhì)譜條件為電子電離為70eV，源溫度為200℃，四級(jí)溫度為150℃，40到500m/z連續(xù)掃描。用NIST數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，測(cè)得內(nèi)生菌Jaased1共產(chǎn)生至少15種揮發(fā)性物質(zhì)(見(jiàn)圖1)，分別為2-十一酮(RT＝11.06)、2-十三烷酮(RT＝11.93)、2-苯乙醇(RT＝8.35)、2-庚酮(RT＝4.36)、2-壬酮(RT＝8.01)、2-壬醇(RT＝8.16)、2-癸醇(RT＝9.17)、2-十一醇(RT＝11.16)、2-十二酮(RT＝11.93)、2-十三醇(RT＝13.77)、2，6-二叔基對(duì)甲苯(RT＝13.94)、2-十四酮(RT＝14.48)、2-癸酮(RT＝9.05)、5-甲基-2-庚酮(RT＝5.79)、2-十六醇(RT＝14.55)。
揮發(fā)性氣體包括2-十一醇具有抑制西瓜枯萎病菌菌絲生長(zhǎng)、抑制棉花黃萎病菌微菌核萌發(fā)等特點(diǎn)，對(duì)于開(kāi)發(fā)廣譜抗菌藥物具有極高的研究和應(yīng)用價(jià)值，對(duì)于保護(hù)作物及其果實(shí)的天然品質(zhì)、減少農(nóng)藥殘留具有廣泛的應(yīng)用前景。在中間有隔板的90mm培養(yǎng)皿中，一側(cè)倒入PDA培養(yǎng)基(所述的PDA培養(yǎng)基為馬鈴薯20％，葡萄糖2％，瓊脂1.5-2.0％，自然pH值)，接種西瓜枯萎病菌菌餅(直徑為7mm)，另一側(cè)放置滅菌的濾紙，滴加100μL或者0.2g揮發(fā)性化學(xué)物質(zhì)。對(duì)照中加入100μL無(wú)菌水。每處理3皿，重復(fù)3次。用封口膜Parafilm密封培養(yǎng)皿，阻斷培養(yǎng)皿內(nèi)外空氣的流通，將培養(yǎng)皿于25℃培養(yǎng)，當(dāng)對(duì)照菌絲長(zhǎng)滿一隔間后測(cè)定揮發(fā)性化學(xué)物質(zhì)對(duì)菌絲的抑制作用，計(jì)算抑菌率。
結(jié)果表明隔間分別加入揮發(fā)性物質(zhì)后，其中10種揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)西瓜枯萎病菌菌絲生長(zhǎng)有不同程度的抑制作用，2-庚酮、2-壬酮、2-壬醇對(duì)西瓜枯萎病菌菌絲的抑制效果最好，為100％，其余化學(xué)純品對(duì)病菌菌絲抑制率分別為：2-癸酮為71.4％，2-癸醇為69.95％，2-苯乙醇為46.6％，2-十一酮為46.2％，2-十二酮為28.3％，2-十一醇為26.9％，2-十三烷酮為25.1％。
[1] CN201510866778.5內(nèi)生枯草芽孢桿菌抗菌揮發(fā)性物質(zhì)及其鑒定方法