1405-41-0 / 硫酸慶大霉素的應(yīng)用及制備方法

背景及概述^[1][2]

硫酸慶大霉素是獸醫(yī)臨床中治療細菌感染重要抗生素之一，自20 世紀60 年代硫酸慶大霉素首次進入臨床，因其抗菌譜廣、抗菌活性強，在獸醫(yī)臨床上用于治療各種桿菌、銅綠假單胞菌、革蘭氏陽性球菌等敏感菌引起的各種疾病，并被用做動物飼料添加劑廣泛應(yīng)用于動物飼養(yǎng)過程中?，F(xiàn)階段，我國已成為硫酸慶大霉素的主要生產(chǎn)國，尤其在獸醫(yī)臨床中硫酸慶大霉素所用的制劑種類豐富，應(yīng)用也較廣泛。

應(yīng)用^[1,3]

臨床多用于革蘭陰性菌引起的呼吸道、腸道、膽道、泌尿生殖系統(tǒng)、皮膚軟組織等感染或局部感染。本品點眼治療眼部感染。此外，硫酸慶大霉素在獸醫(yī)臨床中的應(yīng)用

1）家禽：采用復(fù)方慶大霉素可溶性粉治療雛雞大腸桿菌病，其治愈率為95%，相對增重率為98.05%，療效明顯優(yōu)于硫酸鏈霉素和強力霉素。通過藥敏試驗發(fā)現(xiàn)硫酸慶大霉素對副雞嗜血桿菌高度敏感，治療效果確切，治愈率高達98%。措毛

2）豬：對初生的仔豬采用灌服硫酸慶大霉素注射液，每次2 mL，連續(xù)觀察21 d，其仔豬腹瀉發(fā)生率為8.61%，遠低于對照組的29.43%，表明硫酸慶大霉素對21 日齡內(nèi)仔豬腹瀉有較好防治效果。

3）反芻動物：采用硫酸慶大霉素結(jié)合rboGMCSF進行奶牛隱性乳房炎治療試驗，其治愈率為50%，明顯優(yōu)于其他對照組。采用硫酸慶大霉素口服凝膠止瀉劑（8 mg/kg）對腹瀉犢牦牛進行治療，其有效率為87.5%，治愈率為75%，且治療后腹瀉犢牦牛血液中Ca2 + 和血清白蛋白（ALB）含量恢復(fù)正常。

4）其他動物：采用硫酸慶大霉素結(jié)合補中益氣丸對犬脾虛泄瀉證的臨床治療效果進行評價，結(jié)果表明，治愈率為87.5%，治愈后白細胞、紅細胞、血紅蛋恢復(fù)較快，和空白組相比，療效更加確切。

藥理作用 ^[3]

本品是一種氨基糖苷類藥物，在細菌體內(nèi)核糖體發(fā)揮作用，抑制細菌蛋白質(zhì)合成，并影響細菌細胞膜的完整性。本品對革蘭陰性和陽性細菌均有作用，在革蘭陰性菌中，對大腸桿菌、產(chǎn)氣桿菌、克雷伯桿菌、奇異變形桿菌、某些吲哚陽性變形桿菌、綠膿桿菌、某些奈瑟菌、某些無色素沙雷桿菌和志賀菌等具有敏感性。在革蘭陽性菌中，金黃色葡萄球菌(包括產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶株)對本品敏感，但臨床多用于革蘭陰性菌的感染。近年來，由于本品的廣泛應(yīng)用，耐藥菌株逐漸增多，綠膿桿菌、克雷伯桿菌、沙雷桿菌和吲哚陽性變形桿菌對本品的耐藥率甚高。

制備 ^[2]

硫酸慶大霉素的制備方法，包括以下步驟：

1)取慶大霉素沙土孢子置于孢子斜面培養(yǎng)基上進行孢子培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為36℃，培養(yǎng)時間為10天，得到斜面培養(yǎng)后的慶大霉素孢子；慶大霉素沙土孢子的制備方法為：

a、沙土孢子培養(yǎng)基的配方按重量百分比計為：可溶性淀粉1.0％，氯化鈉(NaCl)0.05％，硝酸鉀(KNO3)0.1％，碳酸鈣(CaCO3)0.1％，磷酸氫二鉀(K2HPO4)0.02％，麩皮1.8％，硫酸鎂(MgSO4)0.02％，瓊脂2.0％，余量為水(本實施例具體為可溶性淀粉1.0g，氯化鈉(NaCl)0.05g，硝酸鉀(KNO3)0.1g，碳酸鈣(CaCO3)0.1g，磷酸氫二鉀(K2HPO4) 0.02g，麩皮1.8g，硫酸鎂(MgSO4)0.02g，瓊脂2.0g，水94.91g)；配制好的沙土孢子培養(yǎng)基在每個茄子瓶中分裝50ml，經(jīng)溫熱滅菌后，斜放，凝固，溫熱滅菌條件為 0.1MPa，30分鐘；

b、于超凈工作臺上，在火焰保護下，用無菌接種棒挑取砂土孢子0.1g于茄子瓶斜面培養(yǎng)基內(nèi)，先劃中線，而后從下而上往兩邊劃線，均勻鋪開，塞好棉塞；

c、培養(yǎng)與保存：接種好的斜面包扎好后，37℃恒溫室架上培養(yǎng)10天，培養(yǎng)好的孢子斜面，4℃冰箱儲存待用；孢子斜面培養(yǎng)基的配方按重量百分比計為：可溶性淀粉1.0％，氯化鈉0.05％，硝酸鉀 0.1％，碳酸鈣0.1％，磷酸氫二鉀0.02％，麩皮1.8％，硫酸鎂0.02％，瓊脂2.0％，余量為水；

2)將步驟1)中得到的斜面培養(yǎng)后的慶大霉素孢子進行搖瓶培養(yǎng)，搖瓶培養(yǎng)的孢子接入量為：孢子斜面挖取0.25cm2接入一個搖瓶，培養(yǎng)溫度為36℃，培養(yǎng)時間為42小時，得到慶大霉素搖瓶菌絲；搖瓶培養(yǎng)基的配方按重量百分比計為：可溶性淀粉1.0％，氯化鈉0.05％，硝酸鉀0.1％，碳酸鈣0.1％，磷酸氫二鉀0.02％，麩皮1.8％，硫酸鎂0.02％，瓊脂2.0％，余量為水；

3)將步驟2)得到的慶大霉素搖瓶菌絲置于種子培養(yǎng)基上進行種子培養(yǎng)，種子培養(yǎng)的接入量為：慶大霉素搖瓶菌絲按種子培養(yǎng)基體積的千分之二接入搖瓶種子，培養(yǎng)溫度為36 ℃，培養(yǎng)時間為48小時，得到慶大霉素種子培養(yǎng)物；種子培養(yǎng)基的配方按重量百分比計為：淀粉1.5％，玉米粉1.5％，黃豆餅粉1.0％，硝 酸鉀0.05％，蛋白胨0.2％，二氯化鈷(CoCl2)0.0005％，余量為水；

4)將步驟3)得到的慶大霉素種子培養(yǎng)物置于繁殖罐中進行擴大培養(yǎng)，慶大霉素種子培養(yǎng)物接入量為擴大培養(yǎng)基體積的20％，培養(yǎng)溫度為36℃，培養(yǎng)時間為42小時，得到慶 大霉素繁殖培養(yǎng)物；擴大培養(yǎng)基的配方按重量百分比計為：淀粉1.5％，玉米粉1.5％，黃豆餅粉1％，硝酸鉀0.05％，蛋白胨0.2％，二氯化鈷(CoCl2)0.0005％，余量為水；

5)將步驟4)得到的慶大霉素繁殖培養(yǎng)物置于發(fā)酵培養(yǎng)基上進行發(fā)酵，慶大霉素繁殖培養(yǎng)物的接入量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的20％，發(fā)酵溫度為34℃，發(fā)酵時間為120小時，得到慶大霉素發(fā)酵產(chǎn)物；發(fā)酵培養(yǎng)基的配方按重量百分比計為：淀粉4.5％，黃豆餅粉3.5％，玉米粉1.0％，碳 酸鈣0.7％，蛋白胨0.3％，二氯化鈷(CoCl2)0.0015％，硝酸鉀0.01％，硫酸銨0.1％，泡敵0.01％，余量為水；

6)將步驟5)得到的慶大霉素發(fā)酵產(chǎn)物進行酸化處理至pH值為2?3，得到慶大霉素酸化液；酸化處理是以濃度30％的鹽酸進行處理，調(diào)pH2～3；

7)將步驟6)得到的慶大霉素酸化液進行中和處理，處理后得到pH值為6.8的慶大霉素溶液；中和處理是以濃度40％的氫氧化鈉進行處理，調(diào)pH6.8；

8)將步驟7)得到的慶大霉素溶液以732樹脂進行吸附處理，得到吸附后慶大霉素溶液；吸附處理所用的732樹脂為001×7強酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂；

9)將步驟8)得到的吸附后慶大霉素溶液上柱去除Ca2+、Mg2+、Cl?1，得到去除離子的慶大霉素溶液；去除Ca2+、Mg2+、Cl?1的柱子為Φ1m高2m柱；

10)將步驟9)得到的去除離子的慶大霉素溶液通過飽和樹脂后以質(zhì)量百分含量為4.5％ 的氨水進行解析，得到慶大霉素解析液；所述飽和樹脂是指每毫升樹脂吸附了8萬單位慶大霉素得到的樹脂；

11)將步驟10)得到的慶大霉素解析液以711樹脂進行脫色，得到慶大霉素脫色液； 脫色處理所用的711樹脂為強堿性苯乙烯系陰離子交換樹脂；

12)將步驟11)得到的慶大霉素脫色液以薄膜進行濃縮，得到慶大霉素濃縮液；濃縮量為500L/h，濃縮至原來的1/7；

13)將步驟12)得到的慶大霉素濃縮液加入硫酸后制得硫酸慶大霉素；硫酸的濃度為 98％，調(diào)至pH5.3；

14)將步驟13)得到硫酸慶大霉素通過噴霧干燥制得硫酸慶大霉素成品，噴霧干燥的條件為進風溫度130℃，出風溫度85℃，噴速100L/h。

主要參考資料

[1] 硫酸慶大霉素臨床藥效學(xué)研究進展

[2] CN201310099477.5硫酸慶大霉素的制備方法

[3] 醫(yī)師案頭用藥參考