1405-41-0 / 硫酸慶大霉素檢測及脫色方法

背景及概述^[1][2]

硫酸慶大霉素(Gentamycinsulfate，GEN)屬氨基糖苷類抗生素，具有水溶性好、抗菌譜廣、細菌耐藥性低、血漿蛋白結合率低、用藥方便和價格便宜等優(yōu)點，是臨床上常用的抗感染藥物。

檢測^[1]

但這類抗生素對耳、腎有一定的毒性，臨床使用時需嚴格控制劑量，因此對硫酸慶大霉素的定量測定具有非常重要的意義。這類抗生素的含量測定多采用微生物法，但這種方法繁瑣、費時、費用高，不適于快速檢測。此外的測定方法還有高效液相色譜法、熒光法和分光光度法等。由于分光光度法具有方法簡便、分析精度高、重復性好、可測范圍廣、儀器價廉等優(yōu)點，是藥物分析中應用較多的一類方法。四羧基鋁酞菁(AlC4Pc)是一種性能優(yōu)異、對光和熱有較好穩(wěn)定性的物質，作為光度試劑可測定蛋白質，但目前應用四羧基鋁酞菁為指示物，以褪色分光光度法測定硫酸慶大霉素的方法尚未見報道。

CN201010579903.1提供一種四羧基鋁酞菁褪色分光光度法測定硫酸慶大霉素的方法。

具體步驟為：

于10mL比色管中依次加入0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、2.5mL 8～11μg/mL的硫酸慶大霉素溶液，0.05～1.5mL pH6.6的克拉克-魯布斯(Clark-Lub’s C-L)緩沖溶液，0.5～2.0mL 0.9～1.1×10^-4mol/L的四羧基鋁酞菁溶液，以不加硫酸慶大霉素的溶液為試劑空白，二次蒸餾水定容至刻度，搖勻。于紫外可見分光光度計上，用1cm比色皿，以二次蒸餾水為參比，在波長690nm處分別測定含硫酸慶大霉素溶液的吸光度值A690nm和試劑空白的吸光度值A0，計算吸光度差值ΔA690nm＝A0-A690nm值，其吸光度差值ΔA690nm與硫酸慶大霉素濃度C在0.1～2.5μg/mL范圍內成線性關系，線性回歸方程為：ΔA690nm＝0.2896C+0.0052，相關系數(shù)0.9998，檢出限0.087μg/mL；另取硫酸慶大霉素注射液1～2mL，稀釋后同法測定吸光度值，計算出硫酸慶大霉素注射液中硫酸慶大霉素的含量。

本發(fā)明測定方法靈敏度高、選擇性好、簡便、快捷、儀器價廉。

應用^[2]

CN201410005888.8公開了一種載硫酸慶大霉素多孔羥基磷灰石/PLGA微球的制備方法，包括以下步驟：將PLGA球加入丙酮/乙醇溶液，再加入磷酸氫二銨溶液，倒入硝酸鈣溶液，調節(jié)pH，陳化，洗滌，烘干，煅燒，研磨，得到多孔羥基磷灰石;將羥基磷灰石粉末置于含硫酸慶大霉素/PEG的水溶液中，冷凍干燥，得到載硫酸慶大霉素的多孔羥基磷灰石；將PLGA溶液和載硫酸慶大霉素的多孔羥基磷灰石混勻，倒入聚乙烯醇溶液中，攪拌，水洗，冷凍干燥即得載硫酸慶大霉素多孔羥基磷灰石/PLGA微球。本發(fā)明制備的載硫酸慶大霉素多孔羥基磷灰石/PLGA微球藥物負載率高，突釋小，生物相容性好，制備工藝簡單，原料易得，成本低廉，易于實現(xiàn)產業(yè)化。

脫色方法^[3]

硫酸慶大霉素生產脫色方法，具體包括以下步驟：

①、將慶大霉素轉鹽液冷卻至3℃～7℃，用孔徑為16～30um濾器過濾，濾液效價為200000～300000u/ml，濾液在460nm處透光度為10%～20%之間；

②、將上述濾液從下往上壓入活性炭纖維吸附塔使濾液緩慢浸透活性炭纖維，活性炭纖維與濾液比例為1kg：20～30L，加熱至55℃～60℃保溫30～60min；或者將上述濾液加熱至55℃～60℃后從下往上壓入活性炭纖維吸附塔使濾液緩慢浸透活性炭纖維，活性炭纖維與濾液比例為1kg：20～30L，55℃～60℃保溫30～60min；將上述進入吸附塔的濾液用壓縮空氣壓出得備用液A；

③、將純化水從下往上壓入吸附塔至浸滿活性炭纖維，洗滌活性炭纖維中的硫酸慶大霉素，然后用壓縮空氣壓出，如此洗滌3次，至洗滌液中硫酸慶大霉素效價在1000u/ml以下，得備用液B；

④、將備用液A與含硫酸慶大霉素效價較高的備用液B合并使效價在150000～170000u/ml之間，在460nm處透光度為92%以上，其余洗滌液留于下一批次洗滌套用；

⑤、將上述合并后的液體經噴霧干燥后得硫酸慶大霉素成品；

⑥、脫色后，首先將pH值2.5～3.0的65℃硫酸溶液從下至上壓入吸附塔至浸滿活性炭纖維，洗滌回收活性炭纖維中的硫酸慶大霉素，然后用壓縮空氣壓出，如此洗滌3次，第3次洗滌液中硫酸慶大霉素效價在500u/ml以下，合并3次洗滌液，按常規(guī)硫酸慶大霉素生產工藝操作（用氫氧化鈉溶液調pH后再進行陽離子樹脂交換，再經稀鹽酸、稀氨洗滌，濃氨洗脫，濃縮，轉鹽脫色，噴霧干燥等工藝步驟）得到成品硫酸慶大霉素，可回收相當于正常批次產量4%左右的硫酸慶大霉素；

⑦、對經過步驟⑥處理過后的活性炭纖維，用0.3Mpa蒸汽在吸附塔從上至下以10BV/h流速進行30min沖洗，然后用壓縮空氣把液體壓出頂凈；

⑧、對經過步驟⑦處理過后的活性炭纖維，再用15％氫氧化鈉溶液從下至上壓入吸附塔至浸滿活性炭纖維，以2BV/h流速進行45min沖洗，然后用壓縮空氣把液體壓出頂凈；最后用純化水沖洗至pH值6～8之間，吸附塔內的活性炭纖維可累計使用50次后廢棄。

上述的慶大霉素轉鹽液冷卻后采用陶瓷濾器或濾布過濾，孔徑為16～30um；所采用的活性炭纖維為粘膠基活性炭纖維，其比表面積在1800～2200m2/g之間。

圖1是本發(fā)明脫色裝置的結構示意圖。

主要參考資料

[1] [中國發(fā)明,中國發(fā)明授權] CN201010579903.1 一種測定硫酸慶大霉素的方法

[2] CN201410005888.8一種載硫酸慶大霉素多孔羥基磷灰石/PLGA微球的制備方法

[3] [中國發(fā)明,中國發(fā)明授權] CN201110133851.X 一種硫酸慶大霉素生產脫色方法