1405-41-0 / 硫酸慶大霉素的制備

背景及概述^[1]

硫酸慶大霉素為氨基糖苷類抗生素，對(duì)各種革蘭陰性細(xì)菌及革蘭陽性細(xì)菌都有良好抗菌作用，對(duì)各種腸桿菌科細(xì)菌如大腸埃希菌、克雷伯菌屬、變形桿菌屬、沙門菌屬、志賀菌屬、腸桿菌屬、沙雷菌屬及銅綠假單胞菌等有良好抗菌作用，奈瑟菌屬和流感嗜血桿菌對(duì)該品中度敏感。對(duì)布魯菌屬、鼠疫桿菌、不動(dòng)桿菌屬、胎兒彎曲菌也有一定作用。對(duì)葡萄球菌屬(包括金黃色葡萄球菌和凝固酶陰性葡萄球菌)中甲氧西林敏感菌株的約80％有良好抗菌作用，但甲氧西林耐藥株則對(duì)該品多數(shù)耐藥。對(duì)鏈球菌屬和肺炎鏈球菌的作用較差，腸球菌屬則對(duì)該品大多耐藥，硫酸慶大霉素與β內(nèi)酰胺類合用時(shí)，多數(shù)可獲得協(xié)同抗菌作用。

制備^[1]

硫酸慶大霉素的制備方法，包括以下步驟：

1)取慶大霉素沙土孢子置于孢子斜面培養(yǎng)基上進(jìn)行孢子培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為36℃，培養(yǎng)時(shí)間為10天，得到斜面培養(yǎng)后的慶大霉素孢子；

慶大霉素沙土孢子的制備方法為：

a、沙土孢子培養(yǎng)基的配方按重量百分比計(jì)為：可溶性淀粉1.0％，氯化鈉(NaCl)0.05％，硝酸鉀(KNO₃)0.1％，碳酸鈣(CaCO₃)0.1％，磷酸氫二鉀(K₂HPO₄)0.02％，麩皮1.8％，硫酸鎂(MgSO₄)0.02％，瓊脂2.0％，余量為水(本實(shí)施例具體為可溶性淀粉1.0g，氯化鈉(NaCl)0.05g，硝酸鉀(KNO₃)0.1g，碳酸鈣(CaCO₃)0.1g，磷酸氫二鉀(K₂HPO₄)0.02g，麩皮1.8g，硫酸鎂(MgSO₄)0.02g，瓊脂2.0g，水94.91g)；配制好的沙土孢子培養(yǎng)基在每個(gè)茄子瓶中分裝50ml，經(jīng)溫?zé)釡缇?，斜放，凝固，溫?zé)釡缇鷹l件為0.1MPa，30分鐘；

b、于超凈工作臺(tái)上，在火焰保護(hù)下，用無菌接種棒挑取砂土孢子0.1g于茄子瓶斜面培養(yǎng)基內(nèi)，先劃中線，而后從下而上往兩邊劃線，均勻鋪開，塞好棉塞；

c、培養(yǎng)與保存：接種好的斜面包扎好后，37℃恒溫室架上培養(yǎng)10天，培養(yǎng)好的孢子斜面，4℃冰箱儲(chǔ)存待用；

孢子斜面培養(yǎng)基的配方按重量百分比計(jì)為：可溶性淀粉1.0％，氯化鈉0.05％，硝酸鉀0.1％，碳酸鈣0.1％，磷酸氫二鉀0.02％，麩皮1.8％，硫酸鎂0.02％，瓊脂2.0％，余量為水(本方法具體為可溶性淀粉1.0g，氯化鈉0.05g，硝酸鉀0.1g，碳酸鈣0.1g，磷酸氫二鉀0.02g，麩皮1.8g，硫酸鎂0.02g，瓊脂2.0g，水94.91g)；

2)將步驟1)中得到的斜面培養(yǎng)后的慶大霉素孢子進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，搖瓶培養(yǎng)的孢子接入量為：孢子斜面挖取0.25cm2接入一個(gè)搖瓶，培養(yǎng)溫度為36℃，培養(yǎng)時(shí)間為42小時(shí)，得到慶大霉素?fù)u瓶菌絲；

搖瓶培養(yǎng)基的配方按重量百分比計(jì)為：可溶性淀粉1.0％，氯化鈉0.05％，硝酸鉀0.1％，碳酸鈣0.1％，磷酸氫二鉀0.02％，麩皮1.8％，硫酸鎂0.02％，瓊脂2.0％，余量為水(本方法具體為可溶性淀粉1.0g，氯化鈉0.05g，硝酸鉀0.1g，碳酸鈣0.1g，磷酸氫二鉀0.02g，麩皮1.8g，硫酸鎂0.02g，瓊脂2.0g，水94.91g)；

3)將步驟2)得到的慶大霉素?fù)u瓶菌絲置于種子培養(yǎng)基上進(jìn)行種子培養(yǎng)，種子培養(yǎng)的接入量為：慶大霉素?fù)u瓶菌絲按種子培養(yǎng)基體積的千分之二接入搖瓶種子，培養(yǎng)溫度為36℃，培養(yǎng)時(shí)間為48小時(shí)，得到慶大霉素種子培養(yǎng)物；

種子培養(yǎng)基的配方按重量百分比計(jì)為：淀粉1.5％，玉米粉1.5％，黃豆餅粉1.0％，硝酸鉀0.05％，蛋白胨0.2％，二氯化鈷(CoCl₂)0.0005％，余量為水(本方法具體為淀粉1.5g，玉米粉1.5g，黃豆餅粉1.0g，硝酸鉀0.05g，蛋白胨0.2g，二氯化鈷(CoCl₂)0.0005g，水為95.7495g)；

4)將步驟3)得到的慶大霉素種子培養(yǎng)物置于繁殖罐中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，慶大霉素種子培養(yǎng)物接入量為擴(kuò)大培養(yǎng)基體積的20％，培養(yǎng)溫度為36℃，培養(yǎng)時(shí)間為42小時(shí)，得到慶大霉素繁殖培養(yǎng)物；

擴(kuò)大培養(yǎng)基的配方按重量百分比計(jì)為：淀粉1.5％，玉米粉1.5％，黃豆餅粉1％，硝酸鉀0.05％，蛋白胨0.2％，二氯化鈷(CoCl₂)0.0005％，余量為水(本方法具體為淀粉1.5g，玉米粉1.5g，黃豆餅粉1.0g，硝酸鉀0.05g，蛋白胨0.2g，二氯化鈷(CoCl₂)0.0005g，水為95.7495g)；

5)將步驟4)得到的慶大霉素繁殖培養(yǎng)物置于發(fā)酵培養(yǎng)基上進(jìn)行發(fā)酵，慶大霉素繁殖培養(yǎng)物的接入量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的20％，發(fā)酵溫度為34℃，發(fā)酵時(shí)間為120小時(shí)，得到慶大霉素發(fā)酵產(chǎn)物；

發(fā)酵培養(yǎng)基的配方按重量百分比計(jì)為：淀粉4.5％，黃豆餅粉3.5％，玉米粉1.0％，碳酸鈣0.7％，蛋白胨0.3％，二氯化鈷(CoCl₂)0.0015％，硝酸鉀0.01％，硫酸銨0.1％，泡敵0.01％，余量為水(本方法具體為淀粉4.5g，黃豆餅粉3.5g，玉米粉1.0g，碳酸鈣0.7g，蛋白胨0.3g，二氯化鈷(CoCl₂)0.0015g，硝酸鉀0.01g，硫酸銨0.1g，泡敵0.01g，水為89.8785g)；

6)將步驟5)得到的慶大霉素發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行酸化處理至pH值為2?3，得到慶大霉素酸化液；酸化處理是以濃度30％的鹽酸進(jìn)行處理，調(diào)pH2～3；

7)將步驟6)得到的慶大霉素酸化液進(jìn)行中和處理，處理后得到pH值為6.8的慶大霉素溶液；中和處理是以濃度40％的氫氧化鈉進(jìn)行處理，調(diào)pH6.8；

8)將步驟7)得到的慶大霉素溶液以732樹脂進(jìn)行吸附處理，得到吸附后慶大霉素溶液；吸附處理所用的732樹脂為001×7強(qiáng)酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂；

9)將步驟8)得到的吸附后慶大霉素溶液上柱去除Ca²⁺、Mg²⁺、Cl^?1，得到去除離子的慶大霉素溶液；去除Ca²⁺、Mg²⁺、Cl^?1的柱子為Φ1m高2m柱；

10)將步驟9)得到的去除離子的慶大霉素溶液通過飽和樹脂后以質(zhì)量百分含量為4.5％的氨水進(jìn)行解析，得到慶大霉素解析液；所述飽和樹脂是指每毫升樹脂吸附了8萬單位慶大霉素得到的樹脂；

11)將步驟10)得到的慶大霉素解析液以711樹脂進(jìn)行脫色，得到慶大霉素脫色液；脫色處理所用的711樹脂為強(qiáng)堿性苯乙烯系陰離子交換樹脂；

12)將步驟11)得到的慶大霉素脫色液以薄膜進(jìn)行濃縮，得到慶大霉素濃縮液；濃縮量為500L/h，濃縮至原來的1/7；

13)將步驟12)得到的慶大霉素濃縮液加入硫酸后制得硫酸慶大霉素；硫酸的濃度為98％，調(diào)至pH5.3；

14)將步驟13)得到硫酸慶大霉素通過噴霧干燥制得硫酸慶大霉素成品，噴霧干燥的條件為進(jìn)風(fēng)溫度130℃，出風(fēng)溫度85℃，噴速100L/h。

參考文獻(xiàn)

[1][中國發(fā)明,中國發(fā)明授權(quán)]CN201310099477.5硫酸慶大霉素的制備方法