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食品添加劑的使用在加工食品和方便食品中的應(yīng)用已經(jīng)越來越廣泛。加工食品，如蠔油、醬油、魚露在制作過程中添加防腐劑以抑制微生物生成，維持營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和其他特性，進(jìn)而延長(zhǎng)食品保質(zhì)期。然而，非法添加和過量添加防腐劑會(huì)使消費(fèi)者有過敏反應(yīng)和慢性中毒風(fēng)險(xiǎn)。因此，《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》(GB 2760—2014)規(guī)定了所有防腐劑的最大允許添加濃度。
蠔油、醬油、魚露是人們餐桌上倍受歡迎的調(diào)味品。丙酸鈉(鈣)、雙乙酸鈉作為化學(xué)防腐劑，被廣泛應(yīng)用于糕點(diǎn)、醬油等食品中。GB 2760—2014中規(guī)定，丙酸及其鈉鹽、鈣鹽在醬油中的最大允許使用量為2.5g/kg，而蠔油、魚露中不得使用；雙乙酸鈉在蠔油、醬油和魚露中的最大使用量均為2.5g/kg。食品中丙酸的檢測(cè)方法有氣相色譜法和高效液相色譜法等。雙乙酸鈉的檢測(cè)方法高效液相色譜法和離子色譜法等。林清河等、吳忠興等和項(xiàng)林敏等報(bào)道了高效液相色譜同時(shí)測(cè)定糕點(diǎn)中丙酸鈉(鈣)和雙乙酸鈉的方法。向文娟等報(bào)道了全自動(dòng)固相萃取(SPE)-HPLC法測(cè)定食品中的丙酸鈉(鈣)和雙乙酸鈉。朱洪亮等報(bào)道了高效液相色譜同時(shí)測(cè)定食品中丙酸鈉(鈣)和雙乙酸鈉的方法。李敏等報(bào)道了高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定蒼山蒜米中雙乙酸鈉和丙酸鈣含量。2014年9月29日，我國(guó)收到了韓國(guó)通報(bào)的廈門某企業(yè)蠔油檢測(cè)出丙酸的不合格食品信息，我國(guó)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB2760也規(guī)定蠔油中不得使用丙酸，但有關(guān)蠔油等食品中丙酸鈉(鈣)和雙乙酸鈉含量的檢測(cè)方法尚未見報(bào)道。
GB/T 5009.120—2003、GB/T 23382—2009及GB/T 23383—2009中有關(guān)丙酸鈉(鈣)和雙乙酸鈉含量檢測(cè)的蒸餾法均是稱取25g樣品于500mL蒸餾瓶中，蒸餾至250mL容量瓶中，最終定容體積為250mL。該檢測(cè)方法需樣品量大，定容體積較大，且較為費(fèi)時(shí)。
本發(fā)明的目的在于提供一種快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、實(shí)用的可同時(shí)用于檢測(cè)丙酸鈉(鈣)和雙乙酸鈉的方法。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種用于同時(shí)檢測(cè)丙酸鈉(鈣)和雙乙酸鈉的方法，其特征在于，包括以下步驟，
樣品處理：準(zhǔn)確稱取待測(cè)樣品于凱氏定氮蒸餾裝置中，加入1～3mL0.5～3mol/L的磷酸溶液，進(jìn)行水蒸氣蒸餾，蒸餾液經(jīng)過冷凝后，用比色管作為接收裝置，待蒸餾出23.5-24.5mL餾出液時(shí)停止接收，用0.5～3mol/L的磷酸溶液調(diào)餾出液的pH值至2.7-3.5，加水定容至25ml，搖勻；再經(jīng)0.22～0.45μm微孔濾膜過濾得到濾過液；調(diào)節(jié)餾出液的pH值為2.7-3.5，在此pH值范圍內(nèi)，丙酸鈉(鈣)和雙乙酸鈉可完全轉(zhuǎn)化為丙酸和乙酸進(jìn)行檢測(cè)；
HPLC：將上述所得濾過液進(jìn)行HPLC；
檢測(cè)方法：根據(jù)丙酸的線性方程y1＝284.58x1+0.210，其中x1為丙酸的質(zhì)量濃度，y1為丙酸的峰面積；即可計(jì)算出樣品中丙酸的質(zhì)量濃度；
根據(jù)雙乙酸鈉的線性方程y2＝236.24x2+0.298，其中x2為雙乙酸鈉的質(zhì)量濃度，y2為雙乙酸鈉的峰面積；即可計(jì)算出樣品中雙乙酸鈉的質(zhì)量濃度。
進(jìn)一步，所述樣品處理中，準(zhǔn)確稱取待測(cè)樣品5.00g于凱氏定氮蒸餾裝置中。
進(jìn)一步，所述HPLC的條件為，色譜柱：C18柱，250mm×4.6mm×5μm或等效色譜柱；柱溫：20～40℃；流動(dòng)相為1.5g/L磷酸二氫銨溶液，溶劑為甲醇和水的混合液，用0.5～3mol/L磷酸溶液調(diào)節(jié)pH至2.7～3.5；流速：0.5～2mL/min；進(jìn)樣量：10～20μL。
進(jìn)一步，所述HPLC步驟中，溶劑為體積比5:95～10:90的甲醇和水的混合液。
進(jìn)一步，所述HPLC步驟中，溶劑為體積比10:90的甲醇和水的混合液。
進(jìn)一步，所述待測(cè)樣品為蠔油、醬油或魚露。
本發(fā)明參考國(guó)標(biāo)規(guī)定方法，以蠔油、醬油和魚露為基質(zhì)，首次采用凱氏定氮蒸餾裝置，利用高效液相色譜技術(shù)，建立了可同時(shí)檢測(cè)蠔油、醬油和魚露中丙酸鈉(鈣)和雙乙酸鈉的方法，需用樣品量?jī)H為5g，定容體積為25mL(樣品量大大減少，定容體積也大大減小。因?yàn)槭撬魵庹麴s，定容體積減小意味著節(jié)約能量和時(shí)間)。該方法首次在丙酸鈉(鈣)和雙乙酸鈉含量檢測(cè)中運(yùn)用凱氏定氮蒸餾裝置，快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、實(shí)用。
蠔油是一種風(fēng)味獨(dú)特的調(diào)味品，它具有天然的海產(chǎn)品風(fēng)味、鮮美濃郁的滋味，而且使用方便，營(yíng)養(yǎng)豐富，富含Ca、Fe、Zn、Se等微量元素。醬油是人們生活中常用的調(diào)味品之一，而且它除了調(diào)味作用外，還具有抗氧化等營(yíng)養(yǎng)保健作用。魚露富含多種氨基酸以及Cu、Cr、Zn、I等微量元素，不僅有獨(dú)特的海鮮風(fēng)味，還有抗氧化、降血壓、降低膽固醇等功能特性。蠔油、醬油、魚露都是人們餐桌上倍受歡迎的調(diào)味品，而其中食品添加劑含量的檢測(cè)和監(jiān)控是保障食品安全的重要途徑。本發(fā)明首次結(jié)合凱氏定氮蒸餾裝置，建立了可同時(shí)檢測(cè)蠔油、醬油和魚露中丙酸鈉(鈣)和雙乙酸鈉含量的高效液相色譜法。
本研究以蠔油、醬油和魚露為基質(zhì)，參考國(guó)標(biāo)規(guī)定方法，并結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室對(duì)分析方法的驗(yàn)證經(jīng)驗(yàn)，方法學(xué)驗(yàn)證指標(biāo)包括流動(dòng)相的確定、目標(biāo)物蒸餾體積的確定、線性方程、定量限、準(zhǔn)確度和精密度。本發(fā)明比較了不同的流動(dòng)相，最終選定甲醇-水(10/90，v/v)作為溶劑流動(dòng)相，雙乙酸鈉和丙酸鈉出峰時(shí)間分別為4.91和10.18min，基線平穩(wěn)，峰型和出峰時(shí)間穩(wěn)定；同時(shí)，比較了四種餾出液體積，最終確定餾出液體積為25mL，丙酸鈉(鈣)和雙乙酸鈉的回收率可分別達(dá)到100.3％和98.2％。本方法的檢出限為0.010g/kg，定量限為0.025g/kg；在三種基質(zhì)中，丙酸鈉(鈣)(以丙酸計(jì))和雙乙酸鈉的回收率分別為88.5％～108.3％和86.5％～108.7％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.13％～6.42％和2.02％～6.37％，均能滿足丙酸鈉(鈣)和雙乙酸鈉的檢測(cè)需要。
綜上所述，本方法極大節(jié)約了樣本處理時(shí)間，基質(zhì)干擾少，操作簡(jiǎn)便；方法的線性關(guān)系良好、回收率高、定量限低、重復(fù)性好；實(shí)用性強(qiáng)，可同時(shí)適用于蠔油、醬油和魚露等食品中丙酸鈉(鈣)和雙乙酸鈉含量的測(cè)定。
下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施例，所述實(shí)施例的示例在附圖中示出，其中自始至終相同或類似的標(biāo)號(hào)表示相同或類似的元件或具有相同或類似功能的元件。下面通過參考附圖描述的實(shí)施例是示例性的，旨在用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例中未注明具體技術(shù)或條件者，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
以下實(shí)施例所用儀器：Agilent 1260液相色譜儀，配有DAD檢測(cè)器；德國(guó)賽多利斯電子天平，感量0.1mg和0.01g；凱氏定氮蒸餾裝置。
以下實(shí)施例中的丙酸鈉可以被丙酸鈣替代。
方法：
樣品處理：準(zhǔn)確稱取試樣于凱氏定氮蒸餾裝置中，加入1mL 1mol/L的磷酸溶液，進(jìn)行水蒸氣蒸餾，蒸餾液經(jīng)過冷凝后，用25mL比色管作為接收裝置，待蒸餾出約24mL時(shí)停止接收，用1mol/L的磷酸溶液調(diào)pH值至2.7-3.5左右，加水定容至25ml，搖勻。經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾后，供HPLC測(cè)定。
HPLC：色譜柱：Sapphire C18(250mm×4.6mm×5μm)，柱溫：30℃；流動(dòng)相為1.5g/L磷酸二氫銨溶液(溶劑為甲醇-水的混合液)，用1mol/L磷酸溶液調(diào)節(jié)pH至2.7～3.5；流速：1mL/min；進(jìn)樣量：10μL。
丙酸鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備：準(zhǔn)確稱取1.3g(精確至0.0001g)丙酸鈉，用水定容至100mL，配制成相當(dāng)于含10mg/mL丙酸的丙酸鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。
雙乙酸鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備：準(zhǔn)確稱取1.0g(精確至0.0001g)雙乙酸鈉，用水定容至100mL，配制成10mg/mL的雙乙酸鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。
依次吸取0.0125、0.05、0.125、0.5、1.25、2.5mL丙酸鈉及雙乙酸鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于凱氏定氮蒸餾裝置，加入1mol/L的磷酸溶液1mL，蒸餾出約24mL時(shí)，用1mol/L的磷酸溶液調(diào)pH值至3左右，定容至25mL。得到丙酸鈉(相當(dāng)于丙酸)、雙乙酸鈉的混合工作液濃度分別為0.005、0.02、0.05、0.2、0.5、1.0mg/mL。經(jīng)過0.22μm微孔濾膜過濾，濃度由低到高進(jìn)樣，以濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到：丙酸的線性方程為y＝284.58x+0.210，雙乙酸鈉的線性方程為y＝236.24x+0.298。線性方程的線性相關(guān)系數(shù)均為0.9999。